一种快速高效分离和纯化重组腺病毒相关病毒的方法和用途

摘要：

本发明利用ＡＡＶ病毒颗粒具有抗氯仿处理的特点，提出了一种用PEG/NaCl系统和氯仿快速而高效分离和纯化rＡＡＶ病毒的方法。该方法适合于大规模分离和纯化rＡＡＶ病毒和生产工艺化。尤其适用于以ＨＳＶ病毒为辅助病毒产生的rＡＡＶ的纯化，也可用于无辅助病毒包装系统或无细胞体外包装系统生产的rＡＡＶ的纯化。经本发明纯化的rＡＡＶ病毒可用于基因转移和基因治疗。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN99123723.4

申请日期：1999-11-17

公开/公告号：CN1272538

公开/公告日：2000-11-08

主分类号：C12N7/02

申请/专利权人:北京东康龙病毒生物技术工程研究中心

发明/设计人:吴小兵; 董小岩; 侯云德

主申请人地址:100052北京市宣武区迎新街100号

国别省市代码:北京;11

权利要求：

权利要求书1．本发明提出的rAAV病毒纯化方法由以下步骤组成：a）用氯仿破碎细胞、灭活HSV辅助病毒及使大量细胞蛋白变性沉淀；b）用DNaseI和RNase处理细胞裂解液以降解核酸；c）加NaCl促使rAAV与细胞碎片分离，离心去除细胞碎片；d）用PEG／NaCl沉淀rAAV；e）用氯仿抽提去除杂蛋白和残余的PEG；f）透析除盐；g）用密度梯度离心法或亲和层析法进一步纯化rAAV。