一种提纯葡萄糖氧化酶的方法和装置
本发明涉及提纯葡萄糖氧化酶的方法和装置。该方法在提纯葡萄糖氧化酶的专用装置内进行，配磷酸盐起始缓冲溶液和醋酸盐洗脱液；处理好阴离子交换树脂装入离子交换柱中，用起始缓冲溶液淋洗离子交换柱；配浓度为０．１０—２．０mg／ml葡萄糖氧化酶样品溶液；取下离子交换柱上端橡皮塞，将样品溶液加在填料上，然后用少量的起始缓冲溶液将离子交换柱上残留的样品溶液洗下来，分液漏斗中加入洗脱液开始洗脱，记录洗脱曲线，分别收集峰１和峰２组分。
发明专利
CN99108062.9
1999-06-08
CN1276425
2000-12-13
C12N9/04
中国科学院感光化学研究所
江龙; 戴国亮; 郎爱东; 李津如
100101北京市朝阳区大屯路甲3号
上海华东专利事务所
高存秀
北京;11
权利要求书1．一种提纯葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于；在室温下依下列步骤进行：第一步：准备工作（1）配20mM pH＝8．5的磷酸盐起始缓冲溶液，配含0．2MNaCl的50mMpH＝3．6的醋酸盐缓冲溶液作为洗脱液；（2）处理阴离子交换树脂：将阴离子交换树脂依次用含0．5MNaCl的0．5MNaOH溶液浸泡1小时，用二次水洗至中性；再用5MHCl浸泡1小时，用二次水洗至中性。最后将其浸泡在起始缓冲溶液中，并搅拌；第二步：配浓度为0．10—2．0mg／ml葡萄糖氧化酶的二次水溶液，4℃下保存备用；第三步：用自然沉降法将填料阴离子交换树脂装入离子交换柱中，填料上表面距离子交换柱上端橡皮塞的下表面1cm左右；用起始缓冲溶液反复淋洗离子交换柱树脂，直到流出的溶液pH＝8．5为止；第四步：取下离子交换柱上端橡皮塞，将0．1—2．0ml的葡萄糖氧化酶样品溶液加在填料上端，然后打开离子交换柱下端出口处的止水夹，让样品溶液流至与离子交换柱表面持平，然后分2—3次用少量的起始缓冲溶液将离子交换柱上残留的样品溶液洗下来，关闭止水夹，塞紧离子交换柱上端橡皮塞；第五步：分液漏斗中加入pH＝3．6的洗脱溶液20—50ml，打开离子交换柱下端出口处的止水夹以及分液漏斗的活塞，洗脱溶液从分液漏斗中流出，开始洗脱；第六步：开始洗脱的同时开启记录仪，记录洗脱曲线；控制紫外检测仪出口的流出速度为3—25秒／滴，每滴的体积约为0．044ml；记录洗脱曲线得到两个分离峰，可根据所需要提纯后的葡萄糖氧化酶的量进行多次分离，分别收集峰1和峰2两个组分，4℃下保存；