一种通过循环差减进行大规模cDNA克隆和测序的方法

摘要：

本发明提供了一种ｃＤＮＡ循环差减测序方法，它包括步骤：（１）以生物体的组织为材料，构建高质量的ｃＤＮＡ起始文库；（２）按设定的分档Ｃ_ot值，对步骤（１）的cDNA起始文库进行均质化，从而得到对应于分档Ｃ_ot值的cDNA均质化文库；（３）对于前一步骤的各cDNA均质化库，挑选克隆进行ＤＮＡ测序；（４）利用已测序的cDNA克隆，对前一步骤中的cDNA均质化库进行杂交差减；（５）重复步骤（３）和（４）１—５，０００次。还可在该方法中增加预先杂交差减步骤。该方法可高效而全面地测定某组织或物种的cDNA。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN99102450.8

申请日期：1999-02-26

公开/公告号：CN1264744

公开/公告日：2000-08-30

主分类号：C12Q1/68

申请/专利权人:上海生元基因开发有限公司

发明/设计人:毛裕民; 谢毅

主申请人地址:200001上海市北京东路668号C座608室

专利代理机构:上海专利商标事务所

代理人:徐迅

国别省市代码:上海;31

权利要求：

权利要求书1．一种cDNA测序方法，其特征在于，它包括以下步骤：（1）以生物体的组织为材料，构建cDNA起始文库，其中该文库中的插入片段长度为0．5—3．0kb；（2）按设定的分档Cot值，对步骤（1）的cDNA起始文库进行均质化，从而得到对应于分档Cot值的cDNA均质化文库，其中Co是总DNA浓度，单位是以核苷酸数计的摩尔每升而t是复性时间，单位是秒；（3）对于前一步骤的各cDNA均质化库，分别挑选5—500个克隆进行DNA测序；（4）用已测序的cDNA克隆来合成对应于已测序列的探针，并将该合成的探针与前一步骤中的cDNA均质化库进行杂交差减，从而从该cDNA库中除去已测序的cDNA克隆，并形成差减化处理过的均质化cDNA库；（5）重复步骤（3）和（4）1—5，000次。