一种体外构建DNA文库的方法

摘要：

本发明描述了通过在多核苷酸合成中诱导的模板移位从一系列不同的起始DNA模板和引物体外构建重组同源多核苷酸基因文库的一种方法，其中：A．通过a)DNA模板变性,b）将引物与模板退火，c）使用聚合酶延伸上述引物，d）终止合成，及e）从模板中分离延伸的引物来合成延伸的引物；B．通过a)从模板中分离延伸引物并使用延伸引物作为引物和模板重复A．b）至A．e)步骤，或b)重复A．b）至A.e)步骤来诱导模板移位，C．在适当数量循环的步骤A．和B．a）,A．和B．b）,或其组合的过程后终止此过程。可选择地在使用特定引物的标准PCR反应中扩增多核苷酸，以选择性扩增感兴趣的同源多核苷酸。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN98802958.8

申请日期：1998-03-18

公开/公告号：CN1249784

公开/公告日：2000-04-05

主分类号：C12Q1/68

申请/专利权人:诺沃挪第克公司

发明/设计人:杰斯珀·文德

主申请人地址:丹麦鲍斯韦

专利代理机构:柳沈知识产权律师事务所

代理人:巫肖南

国别省市代码:丹麦;DK

权利要求：

权利要求书1．通过在使用聚合酶的体外多核苷酸合成中诱导的模板移位从一系列不同的起始单或双链亲代DNA模板和引物构建重组同源多核苷酸文库的一种方法，其中A．通过下面方法合成延伸引物或多核苷酸a）将亲代双链DNA模板变性产生单链模板，b）将上述引物与单链DNA模板退火，c）使用上述聚合酶通过起始合成延伸上述引物，d）引起合成的抑制，并e）将双链变性，从模板分离延伸的引物，B．通过下面方法诱异模板移位a）从模板分离新合成的单链延伸引物并使用（A）中产生的上述延伸引物作为引物和模板重复步骤A．b）至A．e），或b）重复步骤A．b）至A．e），C．在适当数目循环的步骤A．和B．a），A．和B．b），或其组合后终止上述过程，并且D．可选择地使用特定引物在标准PCR反应中扩增产生的多核苷酸以选择性扩增感兴趣的同源多核苷酸。