RNA循环逆转录反应方法

摘要：

本发明属生物工程技术领域，是一种循环逆转录反应方法。其过程为对待扩增的ＲＮＡ模板加热变性后，将ＲＴ引物结合到ＲＮＡ链上，由逆转录催化酶催化ＲＴ引物延伸合成ｃＤＮＡ，形成ＲＮＡ－ＤＮＡ杂合双链，重复变性－复性－延伸，循环反应几十次，随后根据需要可偶联ＰＣＲ扩增或直接用于ｃＤＮＡ文库克隆。本发明可有效提高ＲＮＡ分析和检测灵敏度，技术设计简单易行，操作简便，成本低。本发明可应用在一切ＲＴ应用领域。特别适应于ＲＮＡ相关的临床检测和分析。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN98121932.2

申请日期：1998-09-30

公开/公告号：CN1216779

公开/公告日：1999-05-19

主分类号：C12N15/10

申请/专利权人:复旦大学

发明/设计人:毛裕民; 陈燃; 唐榕

主申请人地址:200433上海市邯郸路220号

专利代理机构:复旦大学专利事务所

代理人:陆飞

国别省市代码:上海;31

权利要求：

1．由一份RNA模板循环逆转录得到多倍份的cDNA的反应方法，其特征在于，反应体系在热循环仪上进行热变性一复性－延伸等3个步骤的循环反应过程，每个循环过程控制每步骤的温度和时间参数为：变性，温度条件： 89～95℃，保温时间：5～120秒；复性，温度条件： 55～68℃，保温时间：5～90秒；延伸，温度条件： 60～70℃，保温时间： 60～180秒。