一种固相逐个碱基核酸分析方法和仪器

摘要：

本发明涉及一种与新的核酸序列分析技术，包括技术的方法原理和仪器，该技术原理与以往的核酸序列分析技术原理不同，它可实现核酸的大规模序列分析和突变检测等。该技术的实施对基因组计划的完成，遗传病分析，基因诊断和基因结构分析等研究领域具有重要的应用前景。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN98117403.5

申请日期：1998-08-19

公开/公告号：CN1245218

公开/公告日：2000-02-23

主分类号：C12Q1/00

申请/专利权人:中国人民解放军军事医学科学院放射医学研究所

发明/设计人:王升启

主申请人地址:100850北京市太平路27号院二所殷小刚转

国别省市代码:北京;11

权利要求：

1. 一种核酸序列分析新技术，其特征在于，模板和引物在固相反应,引物或模板固定在一种固相载体上。反应体系中加入聚合酶和适当的缓冲液，每一种核苷分别放置在反应体系中，依次在酶的催化下掺入到新合成的核酸链中，核苷酸上标记有同位素或荧光物质等标记物，每一种核苷酸每一次酶促反应后即进行掺入信号的检测，检测可用同位素检测设备也可用荧光，化学发光及显色等检测设备或技术；具体操作时，将已与测序引物结合的待测序模板固定在一种固相材料上，依次加入含有酶、酶反应缓冲液及荧光物或同位素等标记 dNTPs的 A、 G、 C及T 四种反应池中分别进行延伸反应，每次更换反应池后对延伸反应后的模板进行洗涤并分析标记信号强度，根据检测信号的变化即可分析出待测模板的序列。 如，当加入G反应池后，如测定的信号有增加说明模板一定是C，因为只有模板是C，G才能被酶掺入到新合成的DNA分子，同时检测出荧光信号的增加，而 A、 C、 T均不能掺入，因此无荧光信号的增加，这样依次进行 A、 G、 C、 T四种循环反应，每一种循环包括反应、洗涤和检测三步，每一轮循环反应即可测定一个碱基序列，当有多种模板同时固定在一种固相载体如芯片上时，可对固定在载体上的所有模板同时测序。