以粘粒为基础构建重组单纯疱疹病毒及其用途

摘要：

本发明叙述了一种以含有ＨＳＶ１全基因组的５个粘粒（cos6,cos28,cos14,cos56,cos48)为基础的简便而高效地产生重组单纯疱疹病毒的方法。将含有外源基因的粘粒与其余４个粘粒等摩尔混合，经ＰacＩ酶切后共转染对ＨＳＶ－１感染敏感的细胞，通过５个ＨＳＶ片段的同源重组而产生含有外源基因的重组单纯疱疹病毒。依照这种方法，产生了能表达大肠杆菌lacＺ基因的单纯疱疹病毒ＨＳＶ１－lacＺ１００。ＨＳＶ１－lacＺ１００的用途有：１）作为研究神经传导的示踪剂；２）作为抗单纯疱疹病毒药物及其它抗病毒药物的靶病毒；３）作为ＨＳＶ１扩增子载体研究中的辅助病毒以更灵敏地监测辅助病毒滴度变化。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN98101753.3

申请日期：1998-05-04

公开/公告号：CN1234441

公开/公告日：1999-11-10

主分类号：C12N7/01

申请/专利权人:病毒基因工程国家重点实验室

发明/设计人:吴小兵; 伍志坚; 董小岩; 侯云德

主申请人地址:100052北京市宣武区迎新街100号朱丽辉

国别省市代码:北京;11

权利要求：

1．一种用于产生重组单纯疱病毒的方法，由以下步骤组成：（1）SetC为一套含有HSVI 17株全基因组DNA的5个重组粘粒。由cos6，cos28，cos14，cos56及cos48组成。（2）将外源基因调表达盒DNA片段的两端加XbdI接头，插入重组粘粒cos56的单一XbaI位点中构成cos56-X。将cos6，cos28，cosl4，cos56-X调及cos48 5个粘粒的组合命名为set x。（3）将Set X（5个粘粒摩尔量相等）DNA经PacI酶切后，用脂质体方法共转染HSV敏感细胞，被导入的5个片段在细胞中发生同源重组而生成重组病毒HSV1-X毒种。（4）将得到的毒种进行空斑筛选和纯化，获得重组病毒HSV1-X。