含有EB病毒壳蛋白gp125基因工程菌株的建立及其应用

摘要：

本发明为建立一种含有ＥＢ病毒壳蛋白ｇｐ１２５基因工程菌株及将该菌作为诊断抗原在疾病诊断中的应用，其特点是用基因工程的手段构建壳蛋白ｇｐ１２５的基因结构，并且能够分别在原核和真核系统中表达，再经纯化，获得纯的，单一的蛋白，用于诊断，检查人血清中的相对应的抗体。本发明的优点是：简便，敏感和特异，由于高效表达，从质和量上解决了诊断抗原的来源，降低了成本，使用安全，无污染。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN95120305.3

申请日期：1995-11-01

公开/公告号：CN1132247

公开/公告日：1996-10-02

主分类号：C12N1/21

申请/专利权人:谷淑燕

发明/设计人:谷淑燕; 皮国华

主申请人地址:100052北京市宣武区迎新街100号

国别省市代码:北京;11

权利要求：

一种含有ＥＢ病毒壳蛋白ｇｐ１２５基因的工程菌株，其特征在于壳蛋白基因的构建及在原核系统中的表达为：（１）ＥＢ病毒基因组ＢａｍＨＩ酶解的Ａ片全长１１０００多个碱基对，它被克隆在质粒ｐＢＲ３２２中，其克隆过程如下：用内切酶ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ从Ａ片中获得５２００ｂｐ一段ＤＮＡ，含ｇｐ１２５全部基因，利用这段ＤＮＡ上的两个ＸｈｏＩ酶位点和两点之间的ｐｓｔ－１酶，获得约１０００ｂｐＸｈｏＩ／ｐｓｔ－１区段，含ｇｐ１２５全基因中段的三分之一以上序列；（２）将上述基因插入ｐｕｃ载体，ｐｕｃ系统是大肠杆菌质粒，能在大肠杆菌中独立复制，其中的启动子能使其下游插入的三联密码相匹配的外来ＤＮＡ编码相应的蛋白，将分离得到的ＸｈｏＩ／ｐｓｔ－１基因插入ｐｕｃ载体启动子下游的ＨｉｎｃⅡ／ｐｓｔ－１位点，即用ＨｉｎｃⅡ／ｐｓｔ－１酶将环状的ｐｕｃ质粒ＤＮＡ切成直线状，再用Ｔ↓［４］ＤＮＡ连接酶将ＸｈｏⅠ／ｐｓｔ－１ＤＮＡ连接在质粒ＤＮＡ的切口上，使成重组的环状ＤＮＡ，将其转染进入经氯化钙处理过的大肠杆菌，在选择培养基上能存活的细菌即含重组的ＤＮＡ，获得的细菌株低温保存。