提高重组牛凝乳酶原的表达与复性的方法

摘要：

牛凝乳酶原的高效表达与复性方法属于微生物和酶的技术领域。为提高重组凝乳酶生产中基因表达水平及复性率，本发明采用高效表达质粒可使牛凝乳酶原在大肠杆菌中表达量占细胞总蛋白的３０—４０％，采用优化的溶解包含体及再折叠的工艺可使复性率达到５０％左右。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN95105337.X

申请日期：1995-05-25

公开/公告号：CN1116239

公开/公告日：1996-02-07

主分类号：C12N15/70

申请/专利权人:中国科学院微生物所

发明/设计人:杨开宇; 刘年娟; 张渝英

主申请人地址:100080北京市中关村北一条13号

专利代理机构:中科专利代理有限责任公司

代理人:林道濂

国别省市代码:北京;11

权利要求：

一种以大肠杆菌为表达体系表达牛凝乳酶原基因，经过包含体的溶解、复性、活化一系列后加工工艺生产重组凝乳酶的方法，其特征包括：（1）将编码牛凝乳酶原的基因重组到含有经过优化的核糖体结合部位的高效表达质粒中，转化大肠杆菌，进行诱导表达：（2）凝乳酶原的表达产物以包含体形式存在，用凝乳酶原高效复性的工艺进行溶解，再折选，再经过活化得到有凝乳活性的产物；（3）设计优化核糖体结合部位序列的方法也适用于其他蛋白质。