哺乳动物细胞系和获得糖蛋白的方法

摘要：

本发明涉及哺乳动物细胞系，特别是能以稳定形式表达作为Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒抗原的糖蛋白ｇｐ#O&２５０（２２０），３５０和２５０（２２０）／３５０的仓鼠细胞系，还涉及从无蛋白培养基中培养的细胞中获得糖蛋白的方法。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN94192251.0

申请日期：1994-04-26

公开/公告号：CN1124502

公开/公告日：1996-06-12

主分类号：C12N15/38

申请/专利权人:Ｈ·沃尔夫

发明/设计人:Ｈ·沃尔夫; Ｋ·查尔芬伯格; Ｒ·瓦格纳

主申请人地址:联邦德国雷根斯堡

专利代理机构:中国国际贸易促进委员会专利商标事务所

代理人:张闽

国别省市代码:德国;DE

权利要求：

在无蛋白培养基中稳定地表达作为Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病素抗原的糖蛋白（ｇｐ）２５０（２２０）、糖蛋白（ｇｐ）３５０和／或杂交糖蛋白（ｇｐ）２５０（２２０）／（ｇｐ）３５０的哺乳动物细胞系，它是通过下述步骤得到的（Ａ）从没有选择标记的仓鼠细胞系开始，该选择标记后来被按照（Ａ）（ｃ）所述方法进行染色体整合的载体表达，或被按照（Ｂ）所述方法进行染色体整合的载体表达，（ａ）在含血清培养基中培养细胞，并使它们附着在底物上或相互附着，（ｂ）重复更换部分被消耗的培养基，同时缓慢降低培养基的血清含量，最后对其进行无血清培养－不主动地消除细胞的附着，－可选地，使细胞球形体形成或分开，分离分开的细胞球形体，在悬浮液中培养同时摇动，选择出在小团粒中生长的或单个生长的细胞（ｃ）最后，使选择出的细胞经过如下处理步骤，（ｃａ）用表达上述糖蛋白（ｇｐ）的载体转染细胞系，其中，载体含有一种细胞系所没有的选择标记，（ｃｂ）培养细胞系，利用选择标记选择出一旦不再使用选择因子（抑制剂）就能稳定地表达糖蛋白的细胞，或者（Ｂ）使哺乳动物细胞系首先经过处理步骤（Ａ）（ｃａ）和（Ａ）（ｃｂ），再经过处理步骤（Ａ）（ａ）至（Ａ）（ｂ）。