从苏云金芽孢杆菌中鉴定、定量和纯化杀昆虫蛋白质

摘要：

公开了鉴定由苏云金芽孢杆菌基因表达的蛋白质前毒素的方法。根据该方法，首先在ｐＨ约为９．５的含水悬浮液中用胰蛋白水解酶对含前病毒材料如苏云金芽孢杆菌的多分结晶进行有限的水解以产生子毒素。然后在大于１０的恒定ｐＨ下在渐增的盐较好是氯化钠的梯度中用高效阴离子液相层析法分离子毒素。利用具有渐增浓度盐的并在预定时间和以一定速度被引入的一系列缓冲液达到对所使用的柱特异的梯度条件。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN94107241.X

申请日期：1994-06-27

公开/公告号：CN1114358

公开/公告日：1996-01-03

主分类号：C12Q1/04

申请/专利权人:加拿大国家研究院

发明/设计人:Ｐ·Ｃ·玛丽安; Ｒ·Ｃ·保尔; 矢口诚; Ｌ·提莫斯

主申请人地址:加拿大渥太华

专利代理机构:中国国际贸易促进委员会专利商标事务所

代理人:黄革生

国别省市代码:加拿大;CA

权利要求：

鉴定由苏云金芽孢杆菌基因表达的前毒素的方法，该方法包括：－在ＰＨ范围为１０至１２的水悬浮液中用蛋白水解酶水解含苏云金芽孢杆菌前毒素的材料，以产生被溶解的子毒素，－在范围为１０至１２的基本恒定ＰＨ下和相当于使用第一洗脱液的含水条件下对子毒素进行高效阴离子交换液相层析，所说的第一洗脱液只含有缓冲液关在预定的时间内逐步引入至少一种含缓冲液和适当的盐的其他洗脱液，洗脱液中盐是浓度及时改变，以致使子毒素以生物学活性状态与水解的其他产物分离开，并－根据由子毒素产生的层析信号鉴定并在必要时定量前毒素。