人胰岛素前体基因在大肠杆菌中的直接表达及后加工方法

摘要：

本发明是一种人胰岛素的基因工程生产方法。本法采用了大肠杆菌表达体系，实现了编码人胰岛素前体基因的直接表达，排除了传统采用的融合方式表达，给后加工带来了极大的方便。本法的表达率在２０—３０％，经细胞破碎分离包含体，包含体溶解，二硫键还原及重组，只经一根分子筛柱就可得纯度大于９０％的人胰岛素前体。此产物可直接用胰酶转肽转为人胰岛素，产品的化学结构、生物活性，与人胰岛素相同。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN93103997.5

申请日期：1993-04-10

公开/公告号：CN1075983

公开/公告日：1993-09-08

主分类号：C12P21/02

申请/专利权人:北京大学

发明/设计人:唐建国; 胡美浩

主申请人地址:100871北京市海淀区中关村

专利代理机构:北京大学专利事务所

代理人:孙博宁

国别省市代码:北京;11

权利要求：

一种以大肠杆菌为表达体系直接表达人胰岛素前体，并进行简单的后加工，拿到人胰岛素前体，以至人胰岛素的方法并适用于多肽物质的生产其特征在于所述方法包括：（1）将编码人胰岛素前体的基因重组到表达质粒启动子的下游．一转化大肠杆菌细胞，进行诱导表达；（2）表达产物以包含体形式生成，通过包含体的溶解、还原及重组，可通过分子筛柱一步得到纯度大于90％的前体分子；（3）前体分子可直接用胰酶在水－有机液中进行转肽，得到人胰岛素。