同种异体皮肤细胞的培养方法

摘要：

本发明涉及一种人体皮肤细胞的培养方法，为解决皮源少等问题而研制。该方法是先取少量皮肤组织制成皮片，处理并冲洗至无油滴。将皮片置入皮细胞消化液中冷消化，分离出表皮细胞和真皮成纤维细胞，再分别置入涂有鼠尾胶源的培养瓶中，加足由ＤＭＥＭ、ＦＣＳ、胰岛素、氢化可的松、青链霉素及两性霉素混合配制的培养液，分别在３７℃、５％ＣＯ_２环境中培养。处于增殖高峰的表皮细胞和真皮成纤维细胞可分期进行同种异体创面移植。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN93101655.X

申请日期：1993-02-22

公开/公告号：CN1074708

公开/公告日：1993-07-28

主分类号：C12N5/08

申请/专利权人:北京邮电医院

发明/设计人:岳毅; 王∴

主申请人地址:100032北京市西城区二龙路

专利代理机构:邮电部专利服务中心

代理人:王丽琴

国别省市代码:北京;11

权利要求：

一种同种异体皮肤的培养方法，其特征在于是采用下列操作：１）取健康者皮肤组织，剪除皮下脂肪，制成中厚皮片，用加入青霉素１００万单位，链霉素１００μｇ／ｍｌ及两性霉素０．２５μｇ／ｍｌ的Ｄ－ｈａｎｋ′ｓ洗液充分冲洗至无油滴；２）取０．０２％ＥＤＴＡ和０．２５％胰蛋白酶，按１∶１体积比混合，按比例注入青霉素１００万单位／ｍｌ，链霉素１００μｇ／ｍｌ及两性霉素０．２５μｇ／ｍｌ，配制成皮细胞消化液，将处理好的皮片置入皮细胞消化液中，在４℃环境中冷消化１２～１８小时，分离出表皮组织和真皮组织，再次分别进行３０～６０分钟消化，分离出表皮细胞和真皮成纤维细胞；３）将帮助细胞贴壁的鼠尾胶源铺满培养瓶底，瓶口用氨水棉球塞堵，在鼠尾胶源凝固后用注入青霉素１００万单位／ｍｌ，链霉素１００μｇ／ｍｌ及两性霉素０．２５μｇ／ｍｌ的Ｄ－ｈａｎｋ′ｓ洗液清洗干净；４）按４∶１体积比混合ＤＭＥＭ培养基和小牛血清ＦＣＳ，按比例加入胰岛素５μｇ／ｍｌ，氢化可的松０．５μｇ／ｍｌ，青霉素１００万单位／ｍｌ，链霉素１００μｇ／ｍｌ及两性霉素０．２５μｇ／ｍｌ配制成复合培养液，将分离好的表皮细胞和真皮成纤维细胞分别置入上述培养瓶中，加足复合培养液，在３７℃，５％二氧化碳培养箱内分别培养表皮细胞和真皮成纤维细胞。