用调控方法培养体细胞胚获得人工种子贮藏的方法

摘要：

采用我们发明的调控培养方法，使悬浮培养中的体细胞胚生长发育延缓，获得呼吸较低，胚根生长受抑制的静止状态的体细胞胚。其特点是胚的细胞排列致密硬度增大；贮存物质积累增多，抗逆性强；脱水至含水量为５０％左右，贮存４个月植株转换率为７８％；脱水至含水量１７％，贮存４个月植株转换率为６７％；经贮存后的胚生长的植株较常规培养的体细胞胚生长的植株健壮。这种静止状态的体细胞胚具有耐贮藏容积小，无需特殊条件控制等优点，为人工种子贮存问题开辟了新途径。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN93100273.7

申请日期：1993-01-15

公开/公告号：CN1074482

公开/公告日：1993-07-21

主分类号：C12N5/04

申请/专利权人:北京大学

发明/设计人:黄美娟; 黄绍兴; 朱澄; 苏都莫日根

主申请人地址:100871北京市海淀区北京大学红一楼102号

专利代理机构:北京大学专利事务所

代理人:孙博宁

国别省市代码:北京;11

权利要求：

一种用调控方法培养体细胞胚获得人工种子贮藏的方法，其特征在于所述方法包括：（１）取材日本商用胡萝卜（ＤａｕｃａｓｃａｒｏｔａＬ·）品种日本国分大长人参；（２）愈伤细胞的诱导，将胡萝卜种子表面消毒后，播种在１／２ＭＳ琼脂培养基上发芽，取５－７日龄实生苗的下胚轴和子叶，切成３－４ｍｍ的片段，接种在附加有１．５－２．０ｍｇ／Ｌ，２．４－Ｄ的ＭＳ固体培养基上诱导愈伤细胞；（３）正常的悬浮培养，取上述（２）中诱导８－１２天膨大切段作起始材料，按每瓶６－８切段的接种量转接在装有３５ｍｌ的２０－３５Ｓ培养基（含２０－３５克／升蔗糖的ＭＳ无激素培养基）的三角瓶中，在２４－２７℃下，以９０－１００ｒｐｍ的转速振荡培养。每隔６－８天更换一次新鲜培养基；（４）调控培养，按上述（３）培养１０－２０天后，当球形胚出现时，转入高蔗糖４０－９０（即每升含４０－９０克蔗糖的ＭＳ无激素培养基）的培养基中进行调控培养，其他培养条件同上述（３），每隔６－８天更换一次培养基；（５）收获静止状态胚，按上述（４）调控培养５０－９０天后及时收获，用无菌滤纸将体细胞胚（包括初级体细胞胚和次生体细胞胚）吸干，放置无菌瓶中，用封口膜封住瓶口在室温或冰箱３－６℃贮存，供制作人工种子或胚播种使用。