聚合酶链反应查结核菌标本前处理新方法
本发明提供一种聚合酶链反应查结核菌标本前处理新方法。该方法采用临床标本前处理试剂盒中的试剂，对临床标本进行预处理和前处理，使结核菌ＤＮＡ提取完全，将结核菌扩增前坚硬的类脂质细胞壁破坏掉，使ＤＮＡ快速释放出来，与此同时对阳性、阻性标准质控物与临床标本也一同作相应前处理，并同时进行扩增，再以标准模板对比，来分析评价每次标本前处理的质量。它操作简便，节约试剂，明显提高标本前处理质量和降低成本，可使ＰＣＲ全程结果稳定可靠。
发明专利
CN92111883.X
1992-11-20
CN1071954
1993-05-12
C12Q1/04
沈阳市胸科医院
张欣然; 鄂晓轩; 李明兰; 赵华云
110044辽宁省沈阳市大东区北海街11号
沈阳市专利事务所
刁佩德
辽宁;21
一种聚合酶链反应查结核菌标本前处理新方法，其特征是采用临床标本进行预处理和前处理，同时对阳性标准质控物和阴性标准质控物作相应前处理，具体步骤是：ａ、预处理：将临床标本离心分离后，取上清液或沉淀物备用；ｂ、前处理：取同体积的预处理标本、阳性标准质控物、阴性标准质控物分装各试管中，在各试管中分别加入十二烷基磺酸钠液、氢氧化钠液，其体积比均为２０∶１∶１，于９５－１００℃下水溶１５－２０分钟，然后在各试管中分别加入与其总体积量相同的酚／氯仿液，反复颠倒混合均匀，在４℃下高速离心１０分钟后静止；静止分离后取各上层水相分移新试管中，在各试管中分别加入与水相体积相同的酚／氯仿液，再反复颠倒混合均匀，于４℃下高速离心１０分钟后静止；静止分离后取各上层水相分移新试管中，在各试管中分别加入与水相体积相同的氯仿／异戊醇液，反复颠倒混合均匀，４℃下高速离心１０分钟后静止；静止分离后取各上层水相分移新试管中，在各试管中先分别加入水相体积１／１０的醋酸钠，再分别加入其总体２－２．５倍的无水乙醇，混匀置入－２０℃下冷冻１２小时以上，最后在４℃下高速离心３０分钟后，弃上清液，将各沉淀物分别加入三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠液２０－５０μｌ，混溶沉淀待扩增。