BCL11A基因作为生物标志物在制备辅助检测慢性淋巴细胞白血病试剂盒的用途
本发明涉及分子诊断领域，特别是涉及BCL11A基因作为生物标志物在制备辅助检测慢性淋巴细胞白血病试剂盒的用途。相较于外周血全血白细胞无法检测出白血病与正常人的B细胞中的BCL11A表达差异，本申请从外周血中分离出来B细胞能明显检测出差异，从而可将BCL11A基因作为生物标志物用于制备辅助检测慢性淋巴细胞白血病试剂盒，为白血病的检测提供新的思路，具有重要的临床意义和实用价值。
发明专利
CN202410505342.2
2024-04-24
CN118326038A
2024-07-11
C12Q1/6886(2018.01)
上海领检科技有限公司
尹斌;王牧;刘莎莎
201102 上海市闵行区东兰路320号8号楼2层288室
上海光华专利事务所(普通合伙)
许亦琳%余明伟
上海;31
1.一种检测外周血B细胞中BCL11A基因表达水平的方法，包括以下步骤： 1)收集外周全血液样品，采用磁珠分选获得外周血B细胞，并通过逆转录方法将其中的BCL11A及GAPDH mRNA转变成为cDNA，用作扩增反应的模板； 2)在PCR反应管中加入各成分，使其终浓度分别为：1×PCR buffer、dNTP 0.2mM each、上下游引物0.4μM、Taqman探针0.2μM、1×参比染料ROX II、模板DNA 2μL以及热启动DNA聚合酶0.05U/μL，并用H2O补足到相应扩增体积；将反应管放置于定量PCR仪进行扩增；所述引物和探针分别靶向BCL11A基因和GAPDH内参基因； 3)绘制BCL11A基因以及GAPDH内参基因的标准曲线，得到线性关系：根据所述线性关系求得BCL11A相对于GAPDH的表达水平。 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，获得外周血B细胞的步骤具体包括： S1：收集外周全血液样品与第一缓冲液和分离液混合，离心得到外周血单个核细胞； S2：将外周血单个核细胞与第一缓冲液混合后离心弃上清，底部沉淀与第二缓冲液混合，加入CD19+磁珠孵育，上样分选柱于磁场中进行分选，脱离磁场后加入第二缓冲液得到细胞悬液，离心，沉淀即为外周血B细胞。 3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S1中，第一缓冲液为磷酸缓冲盐溶液，其组分包括氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、等；分离液为Ficoll溶液。 4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S1中，离心后会出现分层现象，按照离心管从上往下的顺序依次分层为：上层：血浆和血小板，中间层：单个核细胞，下层：红细胞和粒细胞。 5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S2中，第二缓冲液为MACS分离缓冲液。 6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，模板的制备过程具体包括： 分别扩增出BCL11A基因和GAPDH内参基因，连接到载体，转化、挑取阳性克隆株，测序鉴定。 7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中，BCL11A基因的上游引物序列为SEQID NO.1；反向引物序列为SEQ ID NO.2；Taqman探针的序列为SEQ ID NO.3。 8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，GAPDH内参基因的定量PCR扩增靶标的正向引物的序列为SEQ ID NO.4；反向引物的序列为SEQ ID NO.5；Taqman探针的序列为SEQIDNO.6。 9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中，所述线性关系为：Ct(GAPDH)＝-4.2378*LgC0(GAPDH)+52.171597；Ct(BCL11A)＝-3.294674*LgC0(BCL11A)+39.75167。 10.如权利要求1～9任一项所述的方法在白血病检测中的用途。