AP2-M基因缺失的重组巴贝斯虫株、构建方法及应用
本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种AP2‑M基因缺失的重组巴贝斯虫株、构建方法及应用。首先，本发明发现通过缺失羊巴贝斯虫新疆株转录因子AP2‑M基因，能够抑制巴贝斯虫的生长，可作为靶点用于制备抑制巴贝斯虫感染的药物；其次，本发明以AP2‑M基因为靶点，构建了羊巴贝斯虫AP2‑M基因缺失虫株，所述羊巴贝斯虫AP2‑M基因缺失虫株的生长率显著下降，且毒力因子表达量下降，可作为巴贝斯虫疫苗的候选虫株，为临床预防和治疗羊巴贝斯虫感染提供了新的靶点和治疗方案。
发明专利
CN202311637237.6
2023-12-01
CN117625821A
2024-03-01
C12Q1/6893(2018.01)
中国农业科学院兰州兽医研究所
王锦明;关贵全;任巧云;杨吉飞;殷宏;罗建勋
730046 甘肃省兰州市城关区徐家坪1号
北京力量专利代理事务所(特殊普通合伙)
毛婷
甘肃;62
1.AP2-M基因为靶点在筛选抑制巴贝斯虫感染药物中的应用，所述药物以AP2-M基因为靶点抑制AP2-M基因或受AP2-M基因调控的基因的表达。 2.通过在巴贝斯虫中缺失AP2-M基因制备巴贝斯虫减毒虫株的应用。 3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述巴贝斯虫为羊巴贝斯虫。 4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述羊巴贝斯虫为羊巴贝斯虫新疆株；所述AP2-M基因的序列如SEQ ID NO.1所示。 5.AP2-M基因缺失的重组巴贝斯虫株，其特征在于，所述巴贝斯虫株为AP2-M基因缺失的巴贝斯虫。 6.如权利要求5所述的重组巴贝斯虫株，其特征在于，所述巴贝斯虫为羊巴贝斯虫。 7.如权利要求6所述的重组巴贝斯虫株，其特征在于，所述羊巴贝斯虫为羊巴贝斯虫新疆株；所述AP2-M基因的序列如SEQ ID NO.1所示。 8.如权利要求5-7任一所述的AP2-M基因缺失的重组巴贝斯虫株的构建方法，其特征在于，所述的方法是通过基因工程手段将原始巴贝斯虫中AP2-M基因缺失。 9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： (1)利用聚合酶链式反应方法，以羊巴贝斯虫新疆株基因组为模版，扩增获得AP2-M基因的5'非翻译区和3'非翻译区、ef1α启动子、rap终止子，基因合成bsd基因和HA编码序列，并克隆至PbluescriptSK(+)质粒中，即为AP2-M基因敲除质粒； (2)将所述AP2-M基因敲除质粒电转染至体外培养的羊巴贝斯虫裂殖子中，经抗性筛选、克隆化、PCR和Western blot验证，获得AP2-M基因缺失的重组巴贝斯虫株。 10.如权利要求5-7任一所述的AP2-M基因缺失的重组巴贝斯虫株在制备巴贝斯虫减毒活疫苗中的应用，或作为模式虫株在用于基因功能研究中的应用。