AS-RAPID结核耐药双联检测引物探针组、试剂盒以及应用

摘要：

本发明涉及AS‑RAPID结核耐药双联检测引物探针组、试剂盒以及应用，属于基因检测技术领域。通过调试AS‑RAPID反应，实现耐利福平结核及耐异烟肼结核双联检检测体系,结合可同时检测两种分子标记的胶体金侧向流试纸条，实现单一反应多联检扩增后产物的可视化检测。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN202311456791.4

申请日期：2023-11-03

公开/公告号：CN117187425A

公开/公告日：2023-12-08

主分类号：C12Q1/689(2018.01)

申请/专利权人:迪飞医学科技(南京)有限公司%南京迪飞医疗器械有限公司

发明/设计人:邵阳;张嫚嫚;梁相志;杨振;崔月利

主申请人地址:210032 江苏省南京市江北新区华康路128号;

专利代理机构:南京新慧恒诚知识产权代理有限公司

代理人:邓唯

权利要求：

1.一种用于检测结核分枝杆菌耐药突变位点重组酶等温扩增的引物探针组，其特征在于，其中包含有用于扩增利福平耐药位点的引物组，其核苷酸序列为： rpoB-S450L-F: TGTCGGGGTTGACCCACAAGCGCCGACTTTT(SEQ ID NO.10) rpoB-H445Y-F: ATGGACCAGAACAACCCGCTGTCGGGGTTGAGCT(SEQ ID NO.22) rpoB-L430P-F: CGATCAAGGAGTTCTTCGGCACCAGCCATCC(SEQ ID NO.33) rpoB-S450L/H445Y/L430P-R: ACACGATCTCGTCGCTAACCACGCCGTCG(SEQ ID NO.34) 包含有用于扩增异烟肼耐药位点的引物组，其核苷酸序列为： katG-S315T-F: ACCAGCGGCCCAAGGTATCTCGCAACGGGAC(SEQ ID NO.45) katG-S315T-R: TGGCACCGGAACCGGTAAGGACGCGATCACCTC(SEQ ID NO.40)。 2.根据权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，还包含：用于利福平耐药检测显色的探针，其核苷酸序列为： AGCCGATCAGACCGATGTTGGGCCCCTCAG/idSp/GGTTTCGATCGGGCACATC (SEQ ID NO.7),idSP位点用于作为核酸外切酶的识别。 3.根据权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，还包含：用于异烟肼耐药检测显色的探针，其核苷酸序列为： AGCGCCAGCAGGGCTCTTCGTCAGCTCCCA/idSp/TCGTAGCCGTACAGGATC (SEQ ID NO.8) ,idSP位点用于作为核酸外切酶的识别。 4.权利要求1-3任一项所述的引物探针组制备用于结核分枝杆菌利福平和异烟肼双耐药联检试剂盒中的应用。 5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，在对样本进行重组酶等温扩增反应时，反应条件是37-45 ℃，10-20 min。 6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，反应体系中用于检测利福平耐药的三条上游引物浓度为400-600 nM，下游引物浓度为200-300 nM，探针浓度为100-200 nM。 7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，反应体系中用于检测利福平耐药的上游引物浓度为100-200 nM，下游引物浓度为200-400 nM，探针浓度为50-150 nM。 8.一种试剂盒，其包含有权利要求1-3任一项所述的引物探针组。