NRPS基因在提高硅藻对水杨酸及其衍生物耐受性中的应用

摘要：

本公开提供一种NRPS基因在提高硅藻对水杨酸及其衍生物耐受性中的应用，通过构建NRPS过表达藻株竞争性结合水杨酸及其衍生物等环境污染物，将水杨酸及其衍生物吸附在硅藻细胞中过表达的NRPS蛋白上，将有助于减少这些污染物直接参与与硅藻生命活动密切相关的初级或次级代谢通路，减缓其对硅藻的毒害作用，从而提高硅藻对水杨酸及其衍生物等污染的耐受性，提高硅藻产量。更为重要的是，构建的NRPS过表达藻株也可用于吸收水杨酸及其衍生物，从而生物修复因这类物质引起的水体污染。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN202311437171.6

申请日期：2023-10-31

公开/公告号：CN117587040A

公开/公告日：2024-02-23

主分类号：C12N15/52(2006.01)

申请/专利权人:温州大学

发明/设计人:邹慧熙;李楠;阎秀峰;赵东升;陈玉婷;许佳敏;刘肖丽

主申请人地址:325035 浙江省温州市瓯海区茶山高教园区温州大学

专利代理机构:北京风雅颂专利代理有限公司

代理人:郑颖颖

国别省市代码:浙江;33

权利要求：

1.一种NRPS基因在提高硅藻对水杨酸及其衍生物耐受性中的应用，所述NRPS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述NRPS基因在硅藻中呈现过表达状态。 2.根据权利要求1所述的应用，包括以下步骤： (1)构建NRPS基因过表达载体：根据NRPS基因的CDS序列设计引物后，进行PCR扩增；扩增产物纯化后，回收酶切产物与pYT28质粒进行连接，得到NRPS基因过表达载体pYT28-NRPS； (2)构建NRPS基因过表达藻株：将NRPS基因过表达载体pYT28NRPS转入含有pTA-Mob质粒的大肠杆菌中，通过大肠杆菌将pYT28NRPS接合转移到硅藻细胞内，获得NRPS基因过表达藻株。 3.根据权利要求2所述的应用，所述步骤(1)中引物的序列为： NRPS-F1： GCATCACCATCACCATCACGGATCCATGACTCAGGACGAGCCGAAGT G； NRPS-R1： GGAGTCCAAGCTCAGCTAATTAAGCTTTTAGGCGGGCTCGTCTCGAG G。 4.根据权利要求2所述的应用，所述pYT28质粒由pPtPuc3质粒转化得到。 5.根据权利要求4所述的应用，所述pYT28质粒由pPtPuc3质粒转化得到，包括： (1)合成包含AP1启动子、T2A、增强型GFP和FcpA终止子的合成序列，并在该合成序列两侧添加XbaI和SphI酶切位点序列； (2)用XbaI和SphI这两个限制性内切酶分别酶切所述合成序列和pPtPuc3质粒后，利用T4 DNA连接酶进行连接，使合成序列插入到pPtPuc3质粒中CEN6-ARSH4-HIS3下游元件的XbaI和SphI酶切位点之间，获得pYT28质粒。 6.根据权利要求2所述的应用，所述大肠杆菌为EPI300。 7.根据权利要求2所述的应用，所述硅藻为三角褐指藻。