ACSL4基因缺失的MDCK纯合子细胞系的构建方法和应用

摘要：

本发明属于生物技术领域，具体涉及ACSL4基因缺失的MDCK纯合子细胞系的构建方法和应用。该构建方法中采用特异性gRNA高效靶向ACSL4基因，结合CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除犬肾细胞MDCK的ACSL4基因，安全快捷、脱靶效应低。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN202311390977.4

申请日期：2023-10-25

公开/公告号：CN117448330A

公开/公告日：2024-01-26

主分类号：C12N15/113(2010.01)

申请/专利权人:山东省农业科学院家禽研究所(山东省无特定病原鸡研究中心)

发明/设计人:袁小远;张玉霞;董雯雯;孟凯;李桂明;于志君

主申请人地址:250100 山东省济南市历城区工业北路23788号

专利代理机构:济南鲁科专利代理有限公司

代理人:滕慧

国别省市代码:山东;37

权利要求：

1.用于靶向敲除ACSL4基因的特异性gRNA，其特征在于，所述gRNA的核苷酸序列为gRNA-A1:TATCCAGAGTGTCAGCTCCGGGG，如SEQ ID NO.1所示。 2.ACSL4基因缺失的MDCK纯合子细胞系的构建方法，其特征在于，包括如下操作步骤： (1)将步骤(1)制得的特异性gRNA和Cas9蛋白以1:3体积比电转化至MDCK细胞； (2)挑选单克隆并通过PCR及测序验证，获得ACSL4基因敲除的MDCK纯合细胞。 3.根据权利要求2所述的ACSL4基因缺失的MDCK纯合子细胞系的构建方法，其特征在于，步骤(3)PCR所用引物如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。 4.一种MDCK纯合子细胞系，其特征在于，由权利要求3所述的构建方法构建而成。 5.根据权利要求4所述的MDCK纯合子细胞系在建立ACSL4基因敲除体外细胞模型中的应用。 6.根据权利要求4所述的MDCK纯合子细胞系在畜禽呼吸道、肠道病毒分离、培养和纯化中的应用。