ATG16L1或其WD40结构域敲除细胞系作为小RNA病毒科病毒生产细胞系的应用
本发明属于基因工程领域，具体涉及ATG16L1或其WD40结构域敲除细胞系作为小RNA病毒科病毒生产细胞系的应用。本发明首先发现，抑制宿主细胞中ATG16L1或其WD40结构域的表达能促进小RNA病毒科病毒的复制；其次，本发明提供了特异性靶向ATG16L1基因WD40结构域的sgRNA，所述sgRNA能够特异性靶向WD40基因，结合CRISPR‑Cas9技术，在细胞系中实现了WD40结构域的敲除，获得的单克隆细胞系能够显著促进小RNA病毒科病毒的复制，提高小RNA病毒科病毒疫苗的生产量和抗原表达量，可作为小核糖核酸病毒科病毒疫苗的生产细胞系，具有广阔的应用前景。
发明专利
CN202311352822.1
2023-10-19
CN117417895A
2024-01-19
C12N5/10(2006.01)
中国农业科学院兰州兽医研究所
郑海学;吴秀萍;杨洋;茹毅;郝荣增;任蕊芳;赵东梅;卢炳州;李亚军;刘华南;赵陇和
730046 甘肃省兰州市城关区徐家坪1号
北京力量专利代理事务所(特殊普通合伙)
毛婷
甘肃;62
1.ATG16L1基因或其WD40结构域敲除细胞系作为小RNA病毒科病毒或病毒疫苗生产细胞系的应用。 2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述小RNA病毒科病毒包括FMDV、EV71、SVA。 3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述细胞系选自PK-15细胞系、VERO细胞系。 4.抑制或者沉默ATG16L1基因或其WD40结构域表达的试剂在制备小RNA病毒科病毒或病毒疫苗生产增效剂中的应用。 5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述小RNA病毒科病毒包括FMDV、EV71、SVA。 6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述抑制或者沉默ATG16L1基因或其WD40结构域表达的试剂为靶向ATG16L1基因WD40结构域的sgRNA。 7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述sgRNA选自sgRNA1或sgRNA2，所述sgRNA1的靶向序列为：TGCAGATGACACCTCCGATC；所述sgRNA2的靶向序列为：CTGATCACACAGAAGAGACC。 8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述sgRNA1由sgRNA1-F和sgRNA1-R退火形成的双链片段： sgRNA1-F：5’-TCTGACCTGGAGACCGAGTG-3’： sgRNA1-R：5’-CGGTCACTGGCACCCTCACT-3’。 9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述sgRNA2由sgRNA2-F和sgRNA2-R退火形成的双链片段： sgRNA2-F：5’-GCAGCTCTTCCTTTTTCTCC-3’： sgRNA2-R：5’-GCATTCTTTGTCAGGTCCAC-3’。