3-甾酮-1，2-脱氢酶突变体、编码基因、载体及应用

摘要：

本发明提出了基于野生型3‑甾酮‑1，2‑脱氢酶改造后的突变体，氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，相比野生型具有更好的催化活性，用于6‑亚甲基雄烯二酮脱氢转化为依西美坦具有显著的经济价值；本发明还利用3‑甾酮‑1，2‑脱氢酶制备依西美坦，通过优化反应体系，可使反应底物浓度能够达到75～100g/L，在转化20h后转化率能够达到98％以上且产物单一无其他杂质产生，克服现有技术脱氢过程收率低，周期长、转化率低的缺陷，具有良好的生产效益。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN202311218367.6

申请日期：2023-09-19

公开/公告号：CN117070482A

公开/公告日：2023-11-17

主分类号：C12N9/02(2006.01)

申请/专利权人:黄冈人福药业有限责任公司

发明/设计人:刘明欣;艾勇泉;陈海林;何鑫;汪声晨;赵静;汪洋;刘林;金海程;王晓宇;应娟;刘诚;王瑞康

主申请人地址:438000 湖北省黄冈市黄州区火车站经济开发区知青路一号

专利代理机构:武汉天领众智专利代理事务所(普通合伙)

代理人:严志加

国别省市代码:湖北;42

权利要求：

1.氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示的3-甾酮-1，2-脱氢酶突变体。 2.编码权利要求1所述突变体的基因。 3.表达载体，其特征在于，含有权利要求2所述的基因。 4.一种菌株，其特征在于，包含有权利要求3所述的表达载体。 5.根据权利要求4所述的菌株，其特征在于，所述菌株为大肠杆菌。 6.3-甾酮-1，2-脱氢酶突变体的生产方法，其特征在于，包括基于权利要求4所述菌株生成的酶突变体库中筛选突变体的步骤。 7.权利要求1所述3-甾酮-1，2-脱氢酶突变体在6-亚甲基雄烯-4-烯-3,17-二酮脱氢制备依西美坦中的应用。 8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述制备过程为，向6-亚甲基雄烯-4-烯-3,17-二酮中加入电子受体、乳化剂及3-甾酮-1，2-脱氢酶突变体，调整pH后，在含氧条件下恒温搅拌反应后经后处理得到依西美坦。 9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述电子受体为甲萘醌；反应条件采用氧气保护或者向溶液通气；反应体系pH为7.5，温度为35℃，使用PEG 200、PEG 300、PEG 400或PEG 600作为乳化剂。 10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述3-甾酮-1，2-脱氢酶突变体的用量与底物质量之比为400u/g； 和/或，所述电子受体的用量为1wt％； 和/或，所述乳化剂为PEG 300。