AGK基因过表达慢病毒载体、AGK慢病毒及构建方法和应用
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种AGK基因过表达慢病毒载体、AGK慢病毒及构建方法和应用。首先公开了一种靶向AGK基因的过表达序列，所述过表达序列的核苷酸序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。本发明构建的慢病毒载体通过细胞实验验证了AGK过表达慢病毒对肿瘤细胞的影响；解决了传统的慢病毒，存在质粒转染效率低、慢病毒滴度不高的问题，为今后更好研究AGK基因奠定良好实验基础，并可广泛应用于体内基因治疗及基因功能研究。
发明专利
CN202311070630.1
2023-08-24
CN117264980A
2023-12-22
C12N15/54(2006.01)
南通市肿瘤医院(南通市第五人民医院)
张思铭;赵亚柯;吴志军;沈爱国
226000 江苏省南通市通州市平潮镇通扬北路30号(南通市青年西路48号)
南通毅帆知识产权代理事务所(普通合伙)
任毅
江苏;32
1. 一种靶向AGK基因的过表达序列，其特征在于，所述过表达序列的核苷酸序列如SEQID NO：1和SEQ ID NO：2所示。 2.一种AGK基因过表达慢病毒载体，其特在于，所述AGK基因过表达慢病毒载体整合有权利要求1所述的过表达序列。 3.一种构建权利要求2所述的AGK基因过表达慢病毒载体的方法，其特征在于，所述AGK基因过表达慢病毒载体以慢病毒GV348为基础进行构建。 4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，包括： S1： 利用权利要求1所述的靶向AGK基因的过表达序列，通过PCR技术扩增AGK基因序列，得到 AGK基因片段； S2：使用限制性内切酶酶切AGK基因片段和慢病毒载体 GV348，然后用 DNA无缝克隆技术，在重组酶的催化下将AGK基因片段和慢病毒载体GV348整合，得到重组连接产物； S3：将重组连接产物转化感受态细胞，并进行PCR鉴定，PCR鉴定为阳性结果且序列正确，即为构建成功的AGK基因过表达慢病毒载体。 5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，PCR鉴定中使用核苷酸序列如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示的序列进行鉴定。 6.一种AGK慢病毒的构建方法，其特征在于，使用包装质粒为 GV348、病毒包装辅助质粒对权利要求2所述的AGK基因过表达慢病毒载体进行包装， 通过共转染细胞，得到 AGK慢病毒。 7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述细胞为293T细胞。 8.根据权利要求6-7所述方法构建得到的AGK慢病毒。 9.根据权利要求1所述的靶向AGK基因的过表达序列、权利要求2所述的AGK基因过表达慢病毒载体、权利要求8所述的AGK病毒在结直肠癌领域中的应用。