22-42日龄肉仔鸡玉米-豆粕型饲粮铜需要量研究方法
本发明公开了22‑42日龄肉仔鸡玉米‑豆粕型饲粮铜需要量研究方法，主要涉及一种研究试验方法。包括以下步骤：S1，各种玉米‑豆粕型饲粮配制；S2，试验鸡育养；S3，试验鸡处理组的饲养饲粮处理；S4，42日龄试验结束试验鸡处理；S5，含量测定得出数据；S6，各类数据分析。本发明的有益效果在于：它观测饲粮不同铜水平对22‑42日龄AA肉仔鸡生长性能(平均耗料量、平均日增重、耗料/增重比和死亡率)、含铜关键酶和功能蛋白(CuZnSOD、COX、LOX、TYR、MAO和铜蓝蛋白)基因表达水平及相关酶活性的影响，从中筛选出特异敏感指标，并拟合最优数学模型以准确评价22‑42日龄肉仔鸡玉米‑豆粕型饲粮铜需要量，为肉鸡生产中科学、合理添补铜提供科学试验依据。
发明专利
CN202310874476.7
2023-07-17
CN116926204A
2023-10-24
C12Q1/6888(2018.01)
扬州大学
朱玲;汪圣晨;罗绪刚
225009 江苏省扬州市大学南路88号
济南驯致一川知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
张增辉
江苏;32
1.22-42日龄肉仔鸡玉米-豆粕型饲粮铜需要量研究方法，其特征在于： 包括以下步骤： S1，配制1-21日龄阶段肉仔鸡玉米-豆粕型饲粮； 配制22-42日龄阶段肉仔鸡不添加铜的玉米-豆粕型饲粮； 配制22-42日龄阶段肉仔鸡添加铜的玉米-豆粕型饲粮，即以无机硫酸铜为添加铜的多种质量比的玉米-豆粕型饲粮； S2，选取若干只1日龄肉鸡公雏，1-21日龄统一饲喂同种1-21日龄阶段肉仔鸡玉米-豆粕型饲粮；于22日龄按体重若干只鸡，随机分为4～8个处理组，每组4～10个重复笼，每个重复笼4～10只鸡，饲养于不锈钢镀塑鸡笼内，试验期为21天； S3，4～8个处理组中有一个处理组是对照组、其余处理组为试验组，其中对照组以22-42日龄阶段肉仔鸡不添加铜的玉米-豆粕型饲粮饲养； 其余试验组以无机硫酸铜为添加铜的多种质量比的玉米-豆粕型饲粮分别饲养； S4，42日龄试验结束，鸡只禁食而不禁水一夜后，以重复笼为单位称鸡空腹重和耗料量，统计22-42日龄鸡只平均日增重、平均日耗料量、耗料增重比和死亡率； S5,选择42日龄试验鸡，禁食而不禁水一夜后，从每个重复笼中选择3只接近笼平均体重的试验鸡；每只鸡心脏穿刺采血，离心取血清分装冻存，以备后续CuZnSOD活性、铜蓝蛋白和铜含量分析； S6，选择42日龄试验鸡，禁食而不禁水一夜后，将鸡宰杀，立即采集适量心、肝(左侧)、肾、胰、脾组织样品，每只鸡的每个组织的样品分别置于离心管中液氮速冻后再冷藏保存，以备分析CuZnSOD、COX、LOX、TRY、MAO和肝铜蓝蛋白的mRNA和蛋白表达水平； S7，步骤S6中每只鸡的每个组织剩余样品分别置于封口袋中，冷藏保存，以备分析CuZnSOD、COX、LOX、TRY、MAO活性和肝铜蓝蛋白及铜含量；且将每个重复笼3只鸡的所有样品按同等比例合并为一个样本进行分析； S8，采用凯氏定氮法(GB/T 6432-1994)测定饲粮原料中的粗蛋白含量； 采用等离子体光学发射光谱仪测定饲粮、血清和组织中的铜含量； 采用试剂盒测定血清CuZnSOD活性； 采用鸡铜蓝蛋白酶联免疫试剂盒进行测定血清铜蓝蛋白浓度； 采用试剂盒测定各组织中CuZnSOD、COX、LOX、TRY、MAO活性和肝铜蓝蛋白浓度； 采用SYBR Green实时荧光定量RT-qPCR法测定组织中CuZnSOD、LOX、TRY、MAOA、MAOB、COX4Ⅰ1、COXⅠ和肝铜蓝蛋白的mRNA表达水平； 采用Western blotting技术测定组织中CuZnSOD、LOX、TRY、MAO、COX4Ⅰ1、COXⅠ和肝铜蓝蛋白的翻译蛋白水平； S9，试验数据拟采用SAS 9.4(2013)软件中的一般线性模型(General Linear Model,GLM)法进行单因素方差分析；用最小显著差异(Least Significant Difference,LSD)法比较各处理平均数间的差异显著性；用不相关比较法(Orthogonal comparisons)分析各指标随饲粮铜添加水平的线性或二次曲线反应，并利用二次曲线、断线和渐近线等数学模型对所有数据进行拟合，从中筛选最佳的拟合模型，以确定肉仔鸡饲粮铜的适宜需要量。 2.根据权利要求1所述22-42日龄肉仔鸡玉米-豆粕型饲粮铜需要量研究方法，其特征在于：步骤S2中的饲养条件为： 每日光照16小时，黑暗8小时，自由采食和饮自来水，饮水水质良好，无污染，常规免疫； 每日观察并记录鸡只健康状况，如有鸡只发病或死亡，立即解剖，观察分析病理死因，并结料； 试验场地和鸡舍清洁卫生，并进行正常消毒； 试验鸡舍通风良好，并保持适宜的温度； 饲料生产按标准进行，不受潮，不结块，无霉变，不添加任何其它促生长剂。 3.根据权利要求2所述22-42日龄肉仔鸡玉米-豆粕型饲粮铜需要量研究方法，其特征在于：步骤S1中配试验饲粮时现场采样，将分别采集玉米、豆粕和各处理组玉米-豆粕型基础饲粮样品，粉碎过200目筛后置于封口样品袋中低温干燥保存，分析粗蛋白、钙和铜含量； 采集饮用自来水，分析其中铜含量。 4.根据权利要求3所述22-42日龄肉仔鸡玉米-豆粕型饲粮铜需要量研究方法，其特征在于：上述步骤S2中，选取350只1日龄肉鸡公雏，1-21日龄统一饲喂同种玉米-豆粕型全价饲粮。 5.根据权利要求4所述22-42日龄肉仔鸡玉米-豆粕型饲粮铜需要量研究方法，其特征在于：上述步骤S2中，于22日龄按体重挑选288只鸡，随机分为6个处理组，每组8个重复，每个重复笼6只鸡。 6.根据权利要求5所述22-42日龄肉仔鸡玉米-豆粕型饲粮铜需要量研究方法，其特征在于：上述步骤S3中，6个处理组分别为一个对照组和5个试验组，5个试验组以无机硫酸铜分别添加3mg/kg、6mg/kg、9mg/kg、12mg/kg、15mg/kg的添加铜的玉米-豆粕型基础饲粮饲养。 7.根据权利要求6所述22-42日龄肉仔鸡玉米-豆粕型饲粮铜需要量研究方法，其特征在于：上述步骤S5中，每只鸡心脏穿刺采血5mL，3000r/min离心10min，取血清分装，置-20℃冰箱冻存。 8.根据权利要求7所述22-42日龄肉仔鸡玉米-豆粕型饲粮铜需要量研究方法，其特征在于：上述步骤S6中，将鸡宰杀，立即采集1g以上心、肝(左侧)、肾、胰、脾组织样品，每只鸡的每个组织的样品分别置于1个2ml离心管中，于-196℃液氮速冻后，置于-80℃低温冰箱保存，以备分析CuZnSOD、COX、LOX、TRY、MAO和肝铜蓝蛋白的mRNA和蛋白表达水平。 9.根据权利要求8所述22-42日龄肉仔鸡玉米-豆粕型饲粮铜需要量研究方法，其特征在于：上述步骤S7中，冷藏保存方式为：于-20℃低温冰箱中保存。 10.根据权利要求1-9任意一项所述22-42日龄肉仔鸡玉米-豆粕型饲粮铜需要量研究方法，其特征在于：无机硫酸铜为试剂级五水硫酸铜，纯度≥99.0％，铜含量25.2％，且饲粮以粉料形式喂给。