3D细胞培养基质套装及其制备方法
本发明公开了3D细胞培养基质套装及其制备方法，配方包括：葡聚糖、聚乙烯醇、交联剂、基质蛋白、糖蛋白、RGD肽、糖胺聚糖、蛋白聚糖、生长因子、分泌蛋白、pH调节剂和细胞染料，方法包括步骤一，称取原料；步骤二，制作水凝胶；步骤三，制作ECM组分；步骤四，组分分存；本发明相较于现有的3D细胞培养基质，通过葡聚糖、聚乙烯醇、交联剂的混合来模拟3D环境，避免动物源成分带来的污染可能性；本发明通过控制交联剂的种类与浓度来控制水凝胶的形成速率与硬度，使其可以满足不同实验的需求，提高了适用性；本发明将各类常见的ECM组分备好分存，制成3D细胞培养基质套装，防止用户因缺少某些ECM组分而导致实验进行停滞。
发明专利
CN202310762746.5
2023-06-27
CN116814522A
2023-09-29
C12N5/00(2006.01)
武汉圣达威科技有限公司
杨玲
430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区东信路SBI创业街2幢804号
武汉科湖知识产权代理事务所(普通合伙)
高玉成
湖北;42
1.3D细胞培养基质套装，配方包括：葡聚糖、聚乙烯醇、交联剂、基质蛋白、糖蛋白、RGD肽、糖胺聚糖、蛋白聚糖、生长因子、分泌蛋白、pH调节剂和细胞染料，其特征在于：各组分的质量百分比含量分别是：21-37％的葡聚糖、14-25％的聚乙烯醇、11-17％的交联剂、8-14％的基质蛋白、6-10％的糖蛋白、2.3-4.5％的RGD肽、1.8-2.5％的糖胺聚糖、3.4-4.2％蛋白聚糖、4.6-7.1％的生长因子、0.8-1.6％的分泌蛋白、1.1-1.5％的pH调节剂、0.7-1.9％的细胞染料。 2.根据权利要求1所述的3D细胞培养基质套装，其特征在于：所述各组分的质量百分比含量分别是：31％的葡聚糖、16％的聚乙烯醇、15％的交联剂、12％的基质蛋白、8％的糖蛋白、2.9％的RGD肽、2.3％的糖胺聚糖、3.6％蛋白聚糖、6.1％的生长因子、1.0％的分泌蛋白、1.2％的pH调节剂、0.9％的细胞染料。 3.3D细胞培养基质套装的制备方法，包括步骤一，称取原料；步骤二，制作水凝胶；步骤三，制作ECM组分；步骤四，组分分存；其特征在于： 其中上述步骤一中，按照各组分的质量百分含量分别是：21-37％的葡聚糖、14-25％的聚乙烯醇、11-17％的交联剂、8-14％的基质蛋白、6-10％的糖蛋白、2.3-4.5％的RGD肽、1.8-2.5％的糖胺聚糖、3.4-4.2％蛋白聚糖、4.6-7.1％的生长因子、0.8-1.6％的分泌蛋白、1.1-1.5％的pH调节剂、0.7-1.9％的细胞染料进行选取，并按照质量百分比之和为1进行称取； 其中上述步骤二中，取步骤一中的葡聚糖和聚乙烯醇，将其投入反应釜中，使其充分混合，然后静置一段时间，然后再加入交联剂，继续反应，最后形成水凝胶； 其中上述步骤三中，取步骤一中的基质蛋白、糖蛋白与RGD肽，将其投入搅拌罐中充分搅拌，一段时间后取出，再取糖胺聚糖、蛋白聚糖投入搅拌罐中进行搅拌后取出，这两种混合物与生长因子、分泌蛋白和pH调节剂共同组成ECM组分； 其中上述步骤四中，使用微载片将上述的骨架聚合物、两种混合物、生长因子、分泌蛋白分别储存下来，然后用试管将pH调节剂和细胞染料进行分别保存，得到所需的3D细胞培养基质套装。 4.根据权利要求3所述的3D细胞培养基质套装的制备方法，其特征在于：所述步骤二中，交联剂选自聚乙二醇、环糊精或硫醇中的一种。 5.根据权利要求3所述的3D细胞培养基质套装的制备方法，其特征在于：所述步骤三中，基质蛋白选自胶原蛋白、弹性蛋白中的一种，糖蛋白选自纤连蛋白、层粘连蛋白中的一种。 6.根据权利要求3所述的3D细胞培养基质套装的制备方法，其特征在于：所述步骤三中，糖胺聚糖选自硫酸乙酰肝素、透明质酸的一种，蛋白聚糖选自玻聚糖、聚癸聚糖中的一种。 7.根据权利要求3所述的3D细胞培养基质套装的制备方法，其特征在于：所述步骤三中，生长因子选自转化生长因子、血管内皮生长因子、血小板衍生生长因子和肝细胞生长因子中的一种，分泌蛋白选自蛋白水解酶、蛋白酶抑制剂中的一种。 8.根据权利要求3所述的3D细胞培养基质套装的制备方法，其特征在于：所述步骤三中，pH调节剂选用双氧水缓冲液，细胞染料选用Hoechst荧光染料，具体为Hoechst 33342。