2-羟乙基对苯二甲酸二酯水解酶突变体及编码基因、重组载体、重组菌株、酶制剂和应用
本发明涉及基因工程领域，公开了一种2‑羟乙基对苯二甲酸二酯水解酶突变体及编码基因、重组载体、重组菌株、酶制剂和应用。该2‑羟乙基对苯二甲酸二酯水解酶突变体为将具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的酶在第109位、第110位、第138位、第225位、第276位、第287位、第312位、第313位、第333位、第335位、第351位、第356位、第387位、第394位、第395位、第401位和第413位中的至少一位进行突变。该2‑羟乙基对苯二甲酸二酯水解酶突变体具有优异的热稳定性，且在高温下催化效率更好。
发明专利
CN202310567973.2
2023-05-17
CN116555222A
2023-08-08
C12N9/18(2006.01)
南京师范大学
李秀娟;李安妮;吴璐璇;宋艺博;崔海洋;胡捷;侯丽亚;唐进;刘扶芮
210046 江苏省南京市栖霞区学林路2号
北京润平知识产权代理有限公司
李娟
江苏;32
1.一种2-羟乙基对苯二甲酸二酯水解酶突变体，其特征在于，该2-羟乙基对苯二甲酸二酯水解酶突变体为将具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的酶在第109位、第110位、第138位、第225位、第276位、第287位、第312位、第313位、第333位、第335位、第351位、第356位、第387位、第394位、第395位、第401位和第413位中的至少一位进行突变。 2.根据权利要求1所述的2-羟乙基对苯二甲酸二酯水解酶突变体，其特征在于，该2-羟乙基对苯二甲酸二酯水解酶突变体为将具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的酶进行(1)-(17)中至少一种所述的突变： (1)第109位酪氨酸Y突变为谷氨酰胺Q、精氨酸R或丙氨酸A； (2)第110位亮氨酸L突变为丙氨酸A； (3)第138位亮氨酸L突变为丙氨酸A； (4)第225位谷氨酰胺Q突变为精氨酸R或苏氨酸T； (5)第276位谷氨酰胺Q突变为酪氨酸Y、甘氨酸G或丙氨酸A； (6)第287位谷氨酸E突变为脯氨酸P； (7)第312位酪氨酸Y突变为谷氨酰胺Q、精氨酸R或丙氨酸A； (8)第313位亮氨酸L突变为缬氨酸V； (9)第333位酪氨酸Y突变为赖氨酸K； (10)第335位亮氨酸L突变为甘氨酸G； (11)第351位亮氨酸L突变为丙氨酸A或天冬氨酸D； (12)第356位组氨酸H突变为丙氨酸A； (13)第387位色氨酸W突变为缬氨酸V； (14)第394位酪氨酸Y突变为苏氨酸T或脯氨酸P； (15)第395位天冬酰胺N突变为苯丙氨酸F； (16)第401位亮氨酸L突变为异亮氨酸I； (17)第413位亮氨酸L突变为甘氨酸G。 3.根据权利要求2所述的2-羟乙基对苯二甲酸二酯水解酶突变体，其特征在于，该2-羟乙基对苯二甲酸二酯水解酶突变体为将具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的酶进行(1)、(5)和(11)中至少一种所述的突变。 4.根据权利要求2所述的2-羟乙基对苯二甲酸二酯水解酶突变体，其特征在于，该2-羟乙基对苯二甲酸二酯水解酶突变体为将具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的酶进行(9)/(14)组合突变、(12)/(14)组合突变、(10)/(12)组合突变、(6)/(13)组合突变和(6)/(15)组合突变中任意一种所述的组合突变； 优选地，该2-羟乙基对苯二甲酸二酯水解酶突变体为将具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的酶进行(12)/(14)组合突变、(10)/(12)组合突变和(9)/(14)组合突变中任意一种所述的组合突变。 5.一种编码2-羟乙基对苯二甲酸二酯水解酶突变体的基因，其特征在于，该基因具有编码权利要求1至4中任意一项所述的2-羟乙基对苯二甲酸二酯水解酶突变体的核苷酸序列。 6.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体含有权利要求5所述的基因； 优选地，所述重组载体的表达载体为pET-22b质粒。 7.一种重组菌株，其特征在于，所述重组菌株含有权利要求5所述的基因或者权利要求6所述的重组载体； 优选地，所述重组菌株为大肠杆菌和/或枯草芽孢杆菌；更优选为大肠杆菌。 8.一种2-羟乙基对苯二甲酸二酯水解酶突变体的制备方法，其特征在于，该制备方法包括：将权利要求7所述的重组菌株接种至发酵培养基中进行发酵。 9.一种酶制剂，其特征在于，该酶制剂包含权利要求8所述的方法制得的2-羟乙基对苯二甲酸二酯水解酶突变体。 10.权利要求1至4中任意一项所述的2-羟乙基对苯二甲酸二酯水解酶突变体、权利要求5所述的基因、权利要求6所述的重组载体、权利要求7所述的重组菌株、权利要求8所述的方法制得的2-羟乙基对苯二甲酸二酯水解酶突变体和权利要求9所述的酶制剂中的至少一种在降解塑料及其中间体中的应用； 优选地，所述塑料及其中间体选自聚对苯二甲酸乙二醇酯、2-羟乙基对苯二甲酸酯和单羟乙基对苯二甲酸酯中的至少一种。