apoea基因缺失斑马鱼突变体的制备方法及其应用

摘要：

本发明公开了一种apoea基因缺失斑马鱼突变体的制备方法，将人工合成的SgRNA片段和商业化的Cas9蛋白混合后，通过显微注射将混合液注射到1细胞期的斑马鱼受精卵中，受精卵培养后孵化，即得；SgRNA片段具有序列表SEQ.ID.NO.1的碱基序列。据此，还建立了一种动脉粥样硬化或高脂血症动物模型。相比传统方法，本发明具有如下显著优势(1)实验周期短；(2)过程简单方便，且基因编辑成功率高；(3)建模时间短，效果稳定的特点。因此，本发明可缩短高脂血症及动脉粥样硬化发病进程、加深发病程度，造模时间短，在幼鱼期实现疾病造模，有利于实验过程中的活体实施观察，可成为斑马鱼高脂血症及动脉粥样硬化疾病良好的动物模型。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN202310557612.X

申请日期：2023-05-17

公开/公告号：CN116769838A

公开/公告日：2023-09-19

主分类号：C12N15/89(2006.01)

申请/专利权人:广西中医药大学

发明/设计人:张帆;郝二伟;邓家刚;侯小涛;杜正彩;夏中尚;谢金玲

主申请人地址:530200 广西壮族自治区南宁市五合大道13号

专利代理机构:广西南宁公平知识产权代理有限公司

代理人:黄宗全

国别省市代码:广西;45

权利要求：

1.一种apoea基因缺失斑马鱼突变体的制备方法，其特征在于：将人工合成的SgRNA片段和商业化的Cas9蛋白混合后，通过显微注射将混合液注射到1细胞期的斑马鱼受精卵中，受精卵培养后孵化，即得；所述SgRNA片段具有序列表SEQ.ID.NO.1的碱基序列。 2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述SgRNA片段是采用一对基因编辑的靶位点序列，加入SgRNA骨架，利用RNA序列体外合成；所述靶位点序列为SgRNAEa1和SgRNAEa2，它们分别具有序列表SEQ.ID.NO.2和SEQ.ID.NO.3的碱基序列。 3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述SgRNA片段和Cas9蛋白按1:1摩尔比例混合。 4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述注射按1nL混合液/卵注射至受精卵的动物极中，注射在产卵后1h内完成。 5.权利要求1至4所述方法得到的apoea基因缺失斑马鱼突变体在构建动物模型中的应用。 6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述动物模型为动脉粥样硬化或高脂血症动物模型。 7.一种动脉粥样硬化或高脂血症模型的构建方法，其特征在于采用权利要求1至4所述方法得到的apoea基因缺失斑马鱼突变体，通过喂养高脂饲料而得。 8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于：所述高脂饲料为正常斑马鱼饲料中额外加入24％脂肪和4％胆固醇制成。 9.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于：所述喂养采用5dpf(受精后5天)斑马鱼，每天喂养高脂饲料两次，连续喂养5-7天。