AtDPBF4和bZIP重组基因片段及其应用

摘要：

本发明提供了AtDPBF4和bZIP重组基因片段4IID3bZIP、4IID4bZIP、4IID5bZIP、4II910bZIP及其应用。通过将拟南芥ABI5亚家族中AtDPBF4的CRII片段分别与AtDPBF3、AtDPBF4、AtDPBF5、At5G42910的bZIP片段连接，获得了上述4个具有转录激活活性的简易转录因子。将重组片段连接载体并分别导入农杆菌后遗传转化拟南芥，最终实现了过表达转重组基因的拟南芥植株。经检测，转基因植株具有种子萌发提前、植株抽薹数目增多、莲座叶数目增多增大、抗旱性及耐盐性增强等应用。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN202310523614.7

申请日期：2023-05-10

公开/公告号：CN116987704A

公开/公告日：2023-11-03

主分类号：C12N15/29(2006.01)

申请/专利权人:兰州理工大学

发明/设计人:马建忠;陈欣;薛才;冯翀;王永刚

主申请人地址:730050 甘肃省兰州市七里河区兰州理工大学校本部生命科学与工程学院

专利代理机构:厦门智慧呈睿知识产权代理事务所(普通合伙)

代理人:杨唯

国别省市代码:甘肃;62

权利要求：

1.拟南芥AtDPBF4和bZIP重组基因片段，其特征在于所述重组基因片段通过将拟南芥AtDPBF4的CRII片段分别与AtDPBF3、AtDPBF4、AtDPBF5、At5G42910的bZIP片段连接，分别构成重组片段4IID3bZIP、4IID4bZIP、4IID5bZIP、4II910bZIP。 2.根据权利要求1所述重组基因片段，其特征在于所述重组基因片段4IID3bZIP如序列表SEQ No.3所示，其包括如序列表SEQ No.1所示的AtDPBF4保守区II和如序列表SEQ No.2所示的AtDPBF3的碱性亮氨酸区；所述重组基因片段4IID4bZIP如序列表SEQ No.5所示，其包括如序列表SEQ No.1所示的AtDPBF4保守区II和如序列表SEQ No.4所示的AtDPBF4的碱性亮氨酸区；所述重组基因片段4IID5bZIP序列如序列表SEQ No.7所示，其包括如序列表SEQ No.1所示的AtDPBF4保守区II和如序列表SEQ No.6所示的AtDPBF5的碱性亮氨酸区；所述重组基因片段4II910bZIP序列如序列表SEQ No.9所示，其包括如序列表SEQ No.1所示的AtDPBF4保守区II和如序列表SEQ No.8所示的At5G42910的碱性亮氨酸区。 3.拟南芥重组基因片段4IID4bZIP和4IID5bZIP在种子提前萌发中的应用，其特征在于所述重组基因片段序列如序列表SEQ No.5和SEQ No.7所示；所述应用通过过表达所述基因片段予以实现。 4.拟南芥重组基因片段4IID3bZIP、4IID4bZIP和4IID5bZIP在增加抽薹数中的应用，其特征在于所述重组基因片段序列如序列表SEQ No.3、SEQ No.5和SEQ No.7所示；所述应用通过过表达所述基因片段予以实现。 5.拟南芥重组基因片段4IID3bZIP、4IID4bZIP和4IID5bZIP在莲座叶数目增多中的应用，其特征在于所述重组基因片段序列如序列表SEQ No.3、SEQ No.5和SEQ No.7所示；所述应用通过过表达所述基因片段予以实现。 6.拟南芥重组基因片段4IID3bZIP、4IID4bZIP和4IID5bZIP在增强抗旱性中的应用，其特征在于所述重组基因片段序列如序列表SEQ No.3、SEQ No.5和SEQ No.7所示；所述应用通过过表达所述基因片段予以实现。 7.拟南芥重组基因片段4IID3bZIP、4IID4bZIP、4IID5bZIP和4II910bZIP在增强耐盐性中的应用，其特征在于所述重组基因片段序列如序列表SEQ No.3、SEQ No.5、SEQ No.7和SEQNo.9所示；所述应用通过过表达所述基因片段予以实现。 8.如权利要求1所述拟南芥重组基因片段4IID3bZIP、4IID4bZIP、4IID5bZIP、4II910bZIP的重组方法，其特征在于所述重组方法包括：(1)总RNA提取反转录；(2)AtDPBF4的CRII区分别与AtDPBF3、AtDPBF4、AtDPBF5、At5G42910的bZIP区扩增；(3)构建植物遗传转化载体p1304-4IID3bZIP、p1304-4IID4bZIP、p1304-4IID5bZIP、p1304-4II910bZIP及序列测定。 9.如权利要求1所述拟南芥重组基因片段4IID3bZIP、4IID4bZIP、4IID5bZIP、4II910bZIP的p1304载体拟南芥遗传转化方法，包括： (1)植物遗传转化重组载体p1304-4IID3bZIP、p1304-4IID4bZIP、p1304-4IID5bZIP、p1304-4II910bZIP的构建；(2)植物遗传转化重组载体p1304-4IID3bZIP、p1304-4IID4bZIP、p1304-4IID5bZIP、p1304-4II910bZIP分别转化农杆菌(GV3101)；(3)农杆菌浸花法转化拟南芥，(4)转基因拟南芥的抗性筛选；(5)转基因拟南芥基因组与转录本的PCR和RT-PCR鉴定：(6)过表达转重组基因片段4IID3bZIP、4IID4bZIP、4IID4bZIP、4II910bZIP的拟南芥植株分别命名为：A.thaliana D3、A.thaliana D4、A.thaliana D5、A.thaliana910。