3D细胞聚集体培养平台的构建方法以及细胞聚集体

摘要：

本发明提供一种3D细胞聚集体培养平台的构建方法以及细胞聚集体。该3D细胞聚集体培养平台的构建方法包括：步骤(i)：用琼脂糖凝胶包被细胞培养器皿的内壁；步骤(ii)：将凝血酶溶液加入细胞培养器皿中；以及步骤(iii)：将细胞悬液加入凝血酶溶液中，其中，细胞悬液通过将培养基加入纤维蛋白原中，配置成浓度为2.5‑10mg/mL的纤维蛋白原溶液后，将纤维蛋白原溶液加入待培养细胞中混匀得到。根据本发明，制备出的细胞聚集体聚集速度快、细胞密度高、细胞不泄露、重现性高、尺寸可调控、可大型化、具有一定的机械强度、可支持多种细胞类型共培养并快速自发融合形成高级组织。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN202310424956.3

申请日期：2023-04-20

公开/公告号：CN116574665A

公开/公告日：2023-08-11

主分类号：C12N5/00(2006.01)

申请/专利权人:中国医学科学院生物医学工程研究所

发明/设计人:张明明;黄鹏羽;赖佳惠;雒苗苗;刘雨婷

主申请人地址:300192 天津市南开区白堤路236号

专利代理机构:北京市尚公律师事务所

代理人:杨敏%贺小明

国别省市代码:天津;12

权利要求：

1.一种3D细胞聚集体培养平台的构建方法，其特征在于，包括： 步骤(i)：用琼脂糖凝胶包被细胞培养器皿的内壁； 步骤(ii)：将凝血酶溶液加入所述细胞培养器皿中；以及 步骤(iii)：将细胞悬液加入所述凝血酶溶液中， 其中，所述凝血酶溶液通过将PBS缓冲液加入凝血酶中，配制成凝血酶母液后，用培养基稀释所述凝血酶母液至凝血酶浓度为2.5-10U/mL来得到， 所述细胞悬液通过将培养基加入纤维蛋白原中，配置成浓度为2.5-10mg/mL的纤维蛋白原溶液后，将所述纤维蛋白原溶液加入待培养细胞中混匀得到。 2.根据权利要求1所述的3D细胞聚集体培养平台的构建方法，其特征在于，所述凝血酶溶液与所述纤维蛋白原溶液的体积比为10:1以上。 3.根据权利要求1所述的3D细胞聚集体培养平台的构建方法，其特征在于，在所述步骤(iii)中，将所述细胞悬液在1秒内加入所述凝血酶溶液中。 4.根据权利要求1所述的3D细胞聚集体培养平台的构建方法，其特征在于，所述待培养细胞为HepG2细胞、MCF-7细胞和HUVEC细胞中的任意一种或两种以上的组合。 5.根据权利要求4所述的3D细胞聚集体培养平台的构建方法，其特征在于，所述待培养细胞为HUVEC细胞与HepG2细胞的数量比为3:1～1:3的混合细胞。 6.根据权利要求1所述的3D细胞聚集体培养平台的构建方法，其特征在于，在所述3D细胞聚集体培养平台中，不加入额外添加物。 7.根据权利要求6所述的3D细胞聚集体培养平台的构建方法，其特征在于，所述额外添加物包括胶原蛋白、壳聚糖、透明质酸、聚乙二醇、结冷胶、明胶、磷酸三钙。 8.根据权利要求4所述的3D细胞聚集体培养平台的构建方法，其特征在于，所述琼脂糖凝胶通过将琼脂糖以1％的浓度溶解在DMEM高糖培养基中制备而成。 9.根据权利要求1所述的3D细胞聚集体培养平台的构建方法，其特征在于，所述琼脂糖凝胶覆盖所述细胞培养器皿的底部并形成U形表面。 10.一种细胞聚集体，其特征在于，所述细胞聚集体是通过权利要求1～9中任一项所述的3D细胞聚集体培养平台的构建方法制备而成。