1，1，2-三氯乙烷降解菌及其应用
本发明涉及污染土壤修复技术领域，具体为1，1，2‑三氯乙烷降解菌及其应用。本发明采用NaCl、K2HPO4、KH2PO4作为无机盐选择培养基，在无机盐选择培养基中加入受1，1，2‑三氯乙烷污染的土壤作为菌源，封口，厌氧培养至对数生长期，转接4‑5次，得到传代液；将传代液涂布于LB固体培养基中，得到1，1，2‑三氯乙烷的降解菌；将1，1，2‑三氯乙烷的降解菌进行划线纯化，得到1，1，2‑三氯乙烷降解菌。然后使用1，1，2‑三氯乙烷降解菌在LB液体培养基中培养所获得的菌剂能实现土壤中高浓度的污染物的降解，并且1，2‑三氯乙烷单菌在20h便能达到生长对数期，生长繁殖情况良好。
发明专利
CN202310228574.3
2023-03-10
CN116396898A
2023-07-07
C12N1/20(2006.01)
江苏诚冉环境修复工程有限公司
钟树明
226001 江苏省南通市崇川区永兴大道919号好盈国际能源中心1幢5层
江苏无锡苏汇专利代理事务所(普通合伙)
沈彬彬
江苏;32
1.1，1，2-三氯乙烷降解菌，其特征在于：所述1，1，2-三氯乙烷降解菌为假单胞菌，DNA序列如SEQ ID NO.1所示。 2.根据权利要求1所述的1，1，2-三氯乙烷降解菌，其特征在于：所述1，1，2-三氯乙烷降解菌的筛菌方法为，包括以下步骤： 步骤一：接种、传代：取无机盐选择培养基，加入受1，1，2-三氯乙烷污染的土壤作为菌源，封口，注入1，1，2-三氯乙烷标准液，厌氧培养至对数生长期，转接4-5次，厌氧瓶中固体颗粒物基本去除，厌氧降解菌得到富集，得到传代液； 步骤二：采用稀释剂对传代液进行稀释，得到稀释传代液；将稀释传代液涂布于LB固体培养基中，得到1，1，2-三氯乙烷的降解菌；将1，1，2-三氯乙烷的降解菌进行划线纯化，进行16sRNA测序，对微生物进行种属鉴定，得到1，1，2-三氯乙烷降解菌。 3.根据权利要求2所述的1，1，2-三氯乙烷降解菌，其特征在于：步骤一中，无机盐选择培养基包括：NaCl1.0g/L、K2HPO41.5g/L、KH2PO40.5g/L，调节pH值为7.0-7.5。 4.根据权利要求2所述的1，1，2-三氯乙烷降解菌，其特征在于：步骤二中，LB固体培养基包括蛋白胨10.0-12.0g/L、酵母粉5.0-7.0g/L、NaCl4.0-6.0g/L、琼脂1.5g/L，调节pH值为7.0-7.5。 5.根据权利要求2所述的1，1，2-三氯乙烷降解菌，其特征在于：步骤一中，加入受1，1，2-三氯乙烷污染的土壤作为菌源，封口，注入1，1，2-三氯乙烷标准液，使培养基内1，1，2-三氯乙烷的浓度为80-120mg/L。 6.根据权利要求2所述的1，1，2-三氯乙烷降解菌，其特征在于：所述稀释剂为乙醇、石油醚、正己烷、丙酮中的任意一种或多种。 7.根据权利要求1所述的1，1，2-三氯乙烷降解菌，其特征在于：步骤一中，厌氧培养20-22h至对数生长期。 8.根据权利要求1-7中任意一项所述的1，1，2-三氯乙烷降解菌在1，1，2-三氯乙烷降解中的应用。 9.根据权利要求8所述的1，1，2-三氯乙烷降解菌在土壤降解中的应用，其特征在于：所述降解1，1，2-三氯乙烷污染物的浓度为0-600mg/kg。