‘豆绿’牡丹的内参基因及其引物和应用
本发明涉及‘豆绿’牡丹的内参基因及其引物和应用，属于生物技术领域，本发明以绿色牡丹‘豆绿’为试验材料，分析9个候选内参基因的表达稳定性，结果表明UBC和MBF1A在‘豆绿’不同组织中最稳定；GAPDH和ACT在‘豆绿’不同发育时期瓣化雄蕊中最稳定。本发明构建了稳定可靠的‘豆绿’定量检测体系，为‘豆绿’牡丹中的基因表达分析及‘豆绿’花型及花色形成分子机理研究提供了依据，为延长‘豆绿’花朵着色时间，提高其观赏品质提供技术支持，并为其他品种绿花牡丹的持绿研究提供参考，还可以为后续培育牡丹绿色花新品种提供理论依据。
发明专利
CN202310052252.8
2023-02-02
CN116287378A
2023-06-23
C12Q1/6895(2018.01)
河南科技大学
周爽;马超;高双成;史国安;周文斌;侯典云
471000 河南省洛阳市涧西区西苑路48号
洛阳公信知识产权事务所(普通合伙)
王艳艳
河南;41
1.定量PCR检测‘豆绿’牡丹不同花器官组织中基因表达的内参基因，所述内参基因为UBC和MBF1A；所述UBC基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：27所示；所述MBF1A基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：24所示。 2.根据权利要求1所述的内参基因，其特征在于：所述‘豆绿’牡丹不同花器官组织包括萼片、花瓣、瓣化雄蕊和瓣化雌蕊。 3.用于扩增权利要求1所述内参基因的特异性引物，其特征在于：扩增内参基因UBC的引物如SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示；扩增内参基因MBF1A的引物如SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示。 4.一种‘豆绿’牡丹不同花器官组织定量PCR检测体系，其特征在于：使用UBC和MBF1A作为内参基因，扩增内参基因UBC的引物如SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示；扩增内参基因MBF1A的引物如SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示。 5.权利要求1所述的内参基因、权利要求3所述的特异性引物或权利要求4所述的定量PCR检测体系在‘豆绿’牡丹不同花器官组织中基因表达检测中的应用。 6.定量PCR检测‘豆绿’牡丹不同发育时期瓣化雄蕊中基因表达的内参基因，其特征在于：所述内参基因为GAPDH和ACT；所述GAPDH基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：25所示；所述ACT基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：19所示。 7.根据权利要求6所述的内参基因，其特征在于：所述‘豆绿’牡丹瓣化雄蕊的不同发育时期包括露色期、绽口期、初开期、半开期、盛开期和始衰期。 8.用于扩增权利要求6所述内参基因的特异性引物，其特征在于：扩增内参基因GAPDH的引物如SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14所示；扩增内参基因ACT的引物如SEQ ID NO:01和SEQ ID NO:02所示。 9.一种‘豆绿’牡丹不同发育时期瓣化雄蕊定量PCR检测体系，其特征在于：使用GAPDH和ACT作为内参基因，扩增内参基因GAPDH的引物如SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14所示；扩增内参基因ACT的引物如SEQ ID NO:01和SEQ ID NO:02所示。 10.权利要求6所述的内参基因、权利要求8所述的特异性引物或权利要求9所述的定量PCR检测体系在‘豆绿’牡丹不同发育时期瓣化雄蕊中基因表达检测中的应用。