3α-类固醇脱氢酶的制备方法和应用
本申请公开了一种3α‑类固醇脱氢酶的制备方法和应用。本申请中本发明提供了基于原核表达体系的3α‑类固醇脱氢酶表达方法，该方法通过来源筛选结合同义密码子偏好性优化，使可溶蛋白表达量提高，并且维持了较高的表达产物活性，适宜工业化生产。
发明专利
CN202310036211.X
2023-01-06
CN116200408A
2023-06-02
C12N15/53(2006.01)
广州达安基因股份有限公司
蒋析文;王佳;刘文丽;罗小丽;刘春奇;陈颖欣
510665 广东省广州市高新技术产业开发区香山路19号
上海上谷知识产权代理有限公司
蔡继清
广东;44
1.一种编码3α-类固醇脱氢酶的分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸经密码子优化，且所述多核苷酸选自以下任一种： (i)如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示的多核苷酸； (ii)与如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示序列的同源性大于95％的多核苷酸；和 (iii)与(i)或(ii)中所述的序列互补的多核苷酸。 2.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括如权利要求1所述的多核苷酸。 3.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为大肠杆菌表达载体，优选为pET-28a(+)。 4.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括如权利要求2或3所述的表达载体；或者 所述宿主细胞的基因组中整合有如权利要求1所述的多核苷酸。 5.一种制备3α-类固醇脱氢酶的方法，其特征在于，所述方法包括步骤： 使含有如权利要求1所述的多核苷酸载体转化宿主细胞； 培养所述宿主细胞，以表达所述3α-类固醇脱氢酶。 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，使用TB培养基培养所述的宿主细胞。 7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在温度为16至19℃下培养所述宿主细胞。 8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，培养所述宿主细胞时，所用培养基中含有卡那霉素抗性基因。 9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，培养所述宿主细胞时，通过IPTG诱导以表达出目的蛋白。 10.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：如权利要求1所述的多核苷酸；或者 如权利要求2或3所述的表达载体；或者 如权利要求4所述的宿主细胞；或者 根据权利要求5至9任一项所述的方法所制备的3α-类固醇脱氢酶。