3-甲基巴豆酸脱羧酶(MDC)变体
本文描述了3‑甲基巴豆酸脱羧酶(MDC)变体，其在将3‑甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示出改进的活性；以及使用这种酶变体产生异丁烯的方法。
发明专利
CN202280024402.8
2022-03-30
CN117120604A
2023-11-24
C12N9/88(2006.01)
环球生物能源公司
B·维利耶;F·斯特里彻尔
法国埃弗里
北京市中咨律师事务所
张莉%黄革生
1.3-甲基巴豆酸脱羧酶(MDC)的变体，其在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面相对于其所来源自的具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列或与SEQ ID NO:1至少55％序列同一性的氨基酸序列的相应MDC显示改进的活性，并且其中在选自SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的位置7,17,27,33,35,45,46,48,51,140,144,183,184,185,222,227,284,285,286,287,288,289,290,292,321,322,327,329,330,331,337,338,355,365,378,380,384,387,388,389,391,392,393,394,395,419,424,425,428,429,431,432,434,436,437,438,439,443,444,446,447,448,449,451,453,457,458,459,460,462,464,465,467,468,470和471的位置，或在与这些位置中任意位置对应的位置，一个或多个氨基酸残基被另一氨基酸残基替代或被缺失，或其中在这些位置的一个或多个处已经进行了插入。 2.权利要求1的MDC变体，其中： (1)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第7位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为半胱氨酸；和/或 (2)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第17位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丝氨酸；和/或 (3)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第27位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为天冬酰胺；和/或 (4)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第33位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为脯氨酸；和/或 (5)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第35位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为缬氨酸；和/或 (6)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第45位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸或谷氨酰胺；和/或 (7)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第46位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸或异亮氨酸；和/或 (8)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第48位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为甲硫氨酸；和/或 (9)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第51位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为天冬氨酸；和/或 (10)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第140或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为亮氨酸；和/或 (11)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第144位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丝氨酸；和/或 (12)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第183位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为酪氨酸；和/或 (13)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第184位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸或丝氨酸；和/或 (14)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第185位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为苏氨酸；和/或 (15)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第122位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为缬氨酸；和/或 (16)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第227位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为亮氨酸或酪氨酸；和/或 (17)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第284位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为天冬氨酸或谷氨酸、或插入脯氨酸；和/或 (18)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第285位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸；和/或 (19)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第286位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、组氨酸、天冬酰胺、丝氨酸或色氨酸；和/或 (20)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第287位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为异亮氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸、或插入丝氨酸；和/或 (21)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第288位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为天冬酰胺或苏氨酸；和/或 (22)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第289位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸、半胱氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、色氨酸或酪氨酸；和/或 (23)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第290位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为谷氨酸；和/或 (24)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第292位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为亮氨酸或缬氨酸；和/或 (25)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第321位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为苏氨酸或缬氨酸；和/或 (26)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第322位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为苏氨酸；和/或 (27)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第327位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丝氨酸；和/或 (28)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第329位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丝氨酸；和/或 (29)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第330位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为缬氨酸；和/或 (30)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第331位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为甘氨酸；和/或 (30)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第331位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为甘氨酸；和/或 (31)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第337位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为苏氨酸；和/或 (32)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第338位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为甘氨酸；和/或 (33)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第355位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为半胱氨酸、苏氨酸或缬氨酸；和/或 (34)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第365位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为异亮氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸或苏氨酸；和/或 (35)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第378位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为甲硫氨酸；和/或 (36)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第380位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为缬氨酸；和/或 (37)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第384位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸、甘氨酸、亮氨酸、丝氨酸或苏氨酸；和/或 (38)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第387位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸；和/或 (39)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第388位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为甲硫氨酸、谷氨酰胺或丝氨酸；和/或 (40)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第389位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸、组氨酸或谷氨酰胺；和/或 (41)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第391位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为异亮氨酸或亮氨酸；和/或 (42)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第392位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为酪氨酸；和/或 (43)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第393位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸；和/或 (44)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第394位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、组氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺或精氨酸；和/或 (45)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第395位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为缬氨酸；和/或 (46)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第419位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸或脯氨酸；和/或 (47)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第424位或在与该位置对应的位置，插入丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、丝氨酸或色氨酸；和/或 (48)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第425位或在与该位置对应的位置，插入色氨酸；和/或 (49)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第428位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为甲硫氨酸或苏氨酸；和/或 (50)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第429位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸、天冬氨酸或缬氨酸、或插入甘氨酸或天冬酰胺；和/或 (51)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第431位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、苏氨酸或缬氨酸、或插入甘氨酸、亮氨酸或天冬酰胺；和/或 (52)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第432位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸、苯丙氨酸或色氨酸；和/或 (53)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第434位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为苯丙氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸或色氨酸；和/或 (54)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第436位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸或色氨酸；和/或 (55)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第437位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为苯丙氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸或缬氨酸；和/或 (56)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第438位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸、或插入天冬氨酸；和/或 (57)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第439位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为亮氨酸或脯氨酸；和/或 (58)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第443位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为组氨酸、或插入丙氨酸、甘氨酸、亮氨酸、精氨酸、苏氨酸或缬氨酸；和/或 (59)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第444位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、精氨酸、苏氨酸或缬氨酸、或插入谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸；和/或 (60)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第446位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为天冬氨酸、甘氨酸或脯氨酸；和/或 (61)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第447位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为苯丙氨酸、组氨酸、异亮氨酸、苏氨酸或色氨酸、或插入赖氨酸、亮氨酸、脯氨酸或酪氨酸；和/或 (62)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第448位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为半胱氨酸、谷氨酸、苏氨酸或缬氨酸、或插入丝氨酸；和/或 (63)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第449位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为天冬酰胺或色氨酸、或插入缬氨酸或丝氨酸；和/或 (64)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第451位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丝氨酸；和/或 (65)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第453位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为亮氨酸；和/或 (66)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第457位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸；和/或 (67)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第458位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为半胱氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、谷氨酰胺或精氨酸、或插入甘氨酸；和/或 (68)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第459位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为甘氨酸、亮氨酸、脯氨酸、精氨酸或苏氨酸；和/或 (69)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第460位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸或酪氨酸；和/或 (70)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第462位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、精氨酸、苏氨酸或缬氨酸、或插入丙氨酸；和/或 (71)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第464位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为脯氨酸；和/或 (72)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第465位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸、异亮氨酸或缬氨酸；和/或 (73)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第467位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为色氨酸；和/或 (74)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第468位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为亮氨酸；和/或 (75)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第470位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为甘氨酸、丝氨酸或苏氨酸；和/或 (76)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第471位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为苯丙氨酸。 3.权利要求1或2的MDC变体，其中所述变体还在选自SEQ ID NO：1所示氨基酸序列中的位置6,15,25,39,43,72,89,126,141,189,223,224,272,283,332,333,336,361,366,368,379,382,385,418,421,422,423,426,430,440,441,445,461,463和469的位置，或在与这些位置中任意位置对应的位置，显示至少一个修饰。 4.权利要求1至3任一项的MDC变体，其中所述变体还在选自SEQ ID NO：1所示氨基酸序列中的位置6,15,25,39,43,72,89,126,141,189,223,224,272,283,332,333,336,361,366,368,379,382,385,418,421,422,423,426,430,440,441,445,461,463和469的位置，或在与这些位置中任意位置对应的位置，显示至少一个修饰，且所述变体是这样的MDC变体，其中： (1)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第6位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为甲硫氨酸；和/或 (2)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第15位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为组氨酸或亮氨酸；和/或 (3)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第25位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为亮氨酸；和/或 (4)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第39位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为甘氨酸；和/或 (5)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第43位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为谷氨酸；和/或 (6)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第72位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为赖氨酸；和/或 (7)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第89位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为天冬酰胺；和/或 (8)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第126位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为赖氨酸；和/或 (9)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第141位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为半胱氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸或酪氨酸；和/或 (10)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第189位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为半胱氨酸；和/或 (11)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第223位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为酪氨酸；和/或 (12)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第224位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸、脯氨酸或谷氨酰胺；和/或 (13)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第272位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸或精氨酸；和/或 (14)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第283位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为半胱氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸；和/或 (15)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第332位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为组氨酸、精氨酸或丝氨酸；和/或 (16)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第333位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为甲硫氨酸；和/或 (17)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第336位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为组氨酸、天冬酰胺或谷氨酰胺；和/或 (18)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第361位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为赖氨酸；和/或 (19)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第3665位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸；和/或 (20)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第368位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丝氨酸；和/或 (21)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第379位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为异亮氨酸；和/或 (22)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第382位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸或亮氨酸；和/或 (23)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第385位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为天冬氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、亮氨酸、脯氨酸、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸或色氨酸；和/或 (24)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第418位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为缬氨酸；和/或 (25)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第421位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为苯丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸或色氨酸、或插入天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、精氨酸、丝氨酸或苏氨酸；和/或 (26)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第422位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为天冬氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸或缬氨酸、或插入赖氨酸；和/或 (27)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第423位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为半胱氨酸或甘氨酸；和/或 (28)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第426位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸或酪氨酸，或插入亮氨酸；和/或 (29)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第430位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸、赖氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸、或插入半胱氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸或丝氨酸；和/或 (30)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第440位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为天冬氨酸或异亮氨酸；和/或 (31)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第441位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为天冬氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸、苏氨酸或缬氨酸；和/或 (32)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第445位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸、谷氨酰胺或苏氨酸、或插入谷氨酰胺；和/或 (33)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第461位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸或酪氨酸；和/或 (34)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第463位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸；和/或 (35)在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第469位或在与该位置对应的位置，氨基酸残基缺失、或替代为丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、组氨酸、天冬酰胺、丝氨酸或苏氨酸。 5.核酸分子，其编码权利要求1至4中任一项的MDC变体。 6.载体，其包含权利要求5的核酸分子。 7.宿主细胞，其包含权利要求5的核酸分子或权利要求6的载体。 8.权利要求1至4中任一项的MDC变体或权利要求7的宿主细胞的用途，用于将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯。 9.用于从3-甲基巴豆酸产生异丁烯的方法，其通过将3-甲基巴豆酸与权利要求1至4中任一项的MDC变体一起孵育。 10.权利要求9的方法，其中所述酶促转化在体外进行。 11.组合物，其包含权利要求1至4中任一项的MDC变体、权利要求5的核酸分子、权利要求6的载体或权利要求7的宿主细胞。 12.组合物，其包含权利要求1至4中任一项的MDC变体、权利要求5的核酸分子、权利要求6的载体或权利要求7的宿主细胞，以及3-甲基巴豆酸。