ADAMTS13变体
本公开提供了在接头3区域中具有氨基酸取代的改进的ADAMTS13变体。本公开还提供了用于产生和使用所述变体的方法。
发明专利
CN202280015448.3
2022-02-17
CN116940674A
2023-10-24
C12N9/64(2006.01)
曼彻斯特大学
斯图尔特·麦克雷·艾伦;基隆·苏
英国曼彻斯特
北京东方亿思知识产权代理有限责任公司
蒋桂梅
英国;GB
1.一种ADAMTS13变体，其具有相对于野生型人ADAMTS13的氨基酸序列在对应于SEQ IDNO:48的区域中包含一个或多个氨基酸取代的氨基酸序列。 2.根据权利要求1所述的ADAMTS13变体，其中所述ADAMTS13变体包含相对于野生型人ADAMTS13的氨基酸序列在一个或多个以下位置处的取代：A1144、A1145、A1146、P1147、P1154、P1171、P1173、P1175、P1180和P1182。 3.根据权利要求1或权利要求2所述的ADAMTS13变体，其中所述ADAMTS13变体包含根据SEQ ID NO:50或156的氨基酸序列。 4.根据权利要求1至3中任一项所述的ADAMTS13变体，其中所述ADAMTS13变体包含相对于野生型人ADAMTS13的氨基酸序列在一个或多个以下位置处的对缬氨酸、异亮氨酸或赖氨酸的取代：A1144、A1145、A1146、P1147、P1154、P1171、P1173、P1175、P1180和P1182。 5.根据权利要求1至4中任一项所述的ADAMTS13变体，其中所述ADAMTS13变体包含： (i)氨基酸序列SEQ ID NO:51、52、53、54、55、56、57、58、59或60；或 (ii)氨基酸序列SEQ ID NO:136、137、138、139、140、141、142、143、144或145；或 (iii)氨基酸序列SEQ ID NO:146、147、148、149、150、151、152、153、154或155。 6.根据权利要求1至5中任一项所述的ADAMTS13变体，其中所述ADAMTS13变体包含相对于野生型人ADAMTS13的氨基酸序列在位置P1180和/或P1182中的一者或两者处的对缬氨酸、异亮氨酸或赖氨酸的取代。 7.根据权利要求1至6中任一项所述的ADAMTS13变体，其中所述ADAMTS13变体包含氨基酸序列SEQ ID NO:59、60、144、145、154或155。 8.根据权利要求1至7中任一项所述的ADAMTS13变体，其中所述ADAMTS13变体包含以下或由以下组成：(i)与氨基酸序列SEQ ID NO:61具有至少60％序列同一性的氨基酸序列；或(ii)与氨基酸序列SEQ ID NO:62具有至少60％序列同一性的氨基酸序列；或(iii)与氨基酸序列SEQ ID NO:63具有至少60％序列同一性的氨基酸序列；或(iv)与氨基酸序列SEQ IDNO:64具有至少60％序列同一性的氨基酸序列；或(v)与氨基酸序列SEQ ID NO:65具有至少60％序列同一性的氨基酸序列；或(vi)与氨基酸序列SEQ ID NO:66具有至少60％序列同一性的氨基酸序列；或(vii)与氨基酸序列SEQ ID NO:67具有至少60％序列同一性的氨基酸序列；或(viii)与氨基酸序列SEQ ID NO:68具有至少60％序列同一性的氨基酸序列；或(ix)与氨基酸序列SEQ ID NO:69具有至少60％序列同一性的氨基酸序列；或(x)与氨基酸序列SEQ ID NO:70具有至少60％序列同一性的氨基酸序列。 9.根据权利要求1至8中任一项所述的ADAMTS13变体，其中所述ADAMTS13变体显示出与野生型人ADAMTS13相比增加的蛋白水解活性。 10.一种核酸，其编码根据权利要求1至9中任一项所述的ADAMTS13变体。 11.一种表达载体，其包含根据权利要求10所述的核酸。 12.一种细胞，其包含根据权利要求1至9中任一项所述的ADAMTS13变体、根据权利要求10所述的核酸、或根据权利要求11所述的表达载体。 13.一种用于产生ADAMTS13变体的方法，其包括在适用于包含根据权利要求10所述的核酸或根据权利要求11所述的表达载体的细胞表达ADAMTS13变体的条件下培养所述细胞。 14.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至9中任一项所述的ADAMTS13变体、根据权利要求10所述的核酸、根据权利要求11所述的表达载体或根据权利要求12所述的细胞，以及药学上可接受的载剂、稀释剂、赋形剂或佐剂。 15.根据权利要求1至9中任一项所述的ADAMTS13变体、根据权利要求10所述的核酸、根据权利要求11所述的表达载体、根据权利要求12所述的细胞或根据权利要求14所述的组合物，其用于药物治疗或预防的方法中。 16.根据权利要求1至9中任一项所述的ADAMTS13变体、根据权利要求10所述的核酸、根据权利要求11所述的表达载体、根据权利要求12所述的细胞或根据权利要求14所述的组合物，其用于治疗或预防特征在于以下中的一者或多者的疾病或病状的方法中：VWF或包含VWF的复合物的水平和/或活性增加；ADAMTS13水平降低；ADAMTS13蛋白水解活性水平降低；血栓形成；以及炎症。 17.根据权利要求1至9中任一项所述的ADAMTS13变体、根据权利要求10所述的核酸、根据权利要求11所述的表达载体、根据权利要求12所述的细胞或根据权利要求14所述的组合物在制造用于治疗或预防特征在于以下中的一者或多者的疾病或病状的方法的药剂中的用途：VWF或包含VWF的复合物的水平和/或活性增加；ADAMTS13水平降低；ADAMTS13蛋白水解活性水平降低；血栓形成；以及炎症。 18.一种治疗或预防特征在于以下中的一者或多者的疾病或病状的方法：VWF或包含VWF的复合物的水平和/或活性增加；ADAMTS13水平降低；ADAMTS13蛋白水解活性水平降低；血栓形成；以及炎症，所述方法包括向受试者施用治疗有效量或预防有效量的根据权利要求1至9中任一项所述的ADAMTS13变体、根据权利要求10所述的核酸、根据权利要求11所述的表达载体、根据权利要求12所述的细胞或根据权利要求14所述的组合物。 19.根据权利要求16所述的供使用的ADAMTS13变体、根据权利要求17所述的用途或根据权利要求18所述的组合物，其中所述疾病或病状选自：特征在于血栓形成的疾病/病状、特征在于炎症的疾病/病状、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)、缺血性中风、出血性中风、蛛网膜下腔出血(SAH)、脑出血(ICH)、慢性血栓栓塞性肺低血压(CTEPH)、心肌梗死(MI)、ST段抬高型心肌梗死(STEMI)、不稳定型心绞痛(UA)、缺血、再灌注、深静脉血栓、肺栓塞、血管内凝血(DIC)、溶血性尿毒症综合征(HUS)、脑梗死、系统性红斑狼疮(SLE)、SARSr-CoV感染引起的疾病(例如SARS-CoV-2；例如COVID-19)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、肺炎、肾损伤、肾病、微血管疾病、痴呆、克罗恩病、炎症性肠病、溃疡性结肠炎和细菌性腹泻。 20.一种裂解VWF的方法，其包括使VWF或包含VWF的复合物与根据权利要求1至9中任一项所述的ADAMTS13变体接触。