23个短串联重复序列的复合扩增体系及试剂盒
本发明属于生物技术领域，涉及23个短串联重复序列的复合扩增体系及试剂盒，用于检测人类基因组中具有多态性的遗传标记基因，属于生物技术领域。本发明涉及在一个PCR体系中同时扩增多个短串联重复序列，具体基因座为22个具有高度遗传多态性的短串联重复序列及1个性别决定位点，分别设计引物并标记荧光基团，该体系具有极高的个体识别率和非父排除率，信息量大，兼容性好。本发明可用于法医个体识别、亲子鉴定以及群体遗传学分析，准确性更高，灵敏度好。
发明专利
CN202211156804.1
2022-09-22
CN115927659A
2023-04-07
C12Q1/6888(2018.01)
苏州阅微基因技术有限公司
高知枭;于在亮;李迎澳;陈初光
215011 江苏省苏州市高新区锦峰路8号15号楼312室
南京纵横知识产权代理有限公司
刘妍妍
江苏;32
1.23个短串联重复序列的复合扩增体系，其特征在于，所述复合扩增体系包括23对引物，可同时扩增22个STR位点：D2S1776、D18S853、D12S391、D1S1677、D1GATA113、D14S1434、D1S1656、D22S1045、D1S1627、D6S1017、D7S1517、D4S2408、D3S4529、D3S1744、D12ATA63、D20S482、D11S4463、D17S1301、D9S1122、D6S474、D10S1248和D2S441，22个STR位点引物分别为： 引物名称引物序列5'-3' D2S1776F ACCTGTGAGTATGTGTGCGT D2S1776R GTCCACCTCAGAGCCTAGAG D18S853F ACTCATAGGTGGGAATCGAACAA D18S853R GGCAAATCTGGCTTTACATACAT D12S391F AACAGGATCAATGGATGCAT D12S391R AGCCATGCTCCTAGTGTCCCT D1S1677F GCCTTGTGAAATTGGCTGAG D1S1677R GCACACATTTATACACATATA D1GATA133F ATTTCTTAGCCTAGATAGATACTTG D1GATA133R TGATTATCTTACTTCTTCCCAC D141434F CAATAGAATGAAAGGCCAAGG D141434R TTCCAGAAACTTCCCCAACTC D1S1656F TCAGAGAAATAGAATCACTAGGGAACC D1S1656R GCTGTGTTGCTCAAGGGTCAACTG D22S1045F CCTATAGACCCTGTCCTAGCCTTC D22S1045R AAAGTGCTCTCAAGAGTGCCCG D1S1627F AAGACTAAAAGATGAACCAAACA D1S1627R ACTTTTGGTCATTTCTATTCATAC D6S1017F CACCCTGGAGATTTCTGTAAGG D6S1017R GATATTGAACCAGATGGGAACG D7S1517F AGACCAGAGCTGTTGCTATTGG D7S1517R TCTGGATAAATGATGATGTTCTTGA D4S2408R GGTACATAACAGTTCAATAGAAAGCTA D4S2408F AAACTTCAACTTCAATTCATCCA D3S4529F GTGGAGGAGACAGACAATAAAGA D3S4529R CTAAGTACCCTAAGGAAGAAGAAAT D3S1744F CTCTGTCATCAGGTTGGGTAA D3S1744R GGCTGGCAGAAGAGGATGTAG D12ATA63F TGGAGTGGGGCAGAAACATTG D12ATA63R CAGAAGGTTGAGGTGGCAGTG D20S482F GCCATGACAATAATGGCAGTG D20S482R GGACTTACCACCAGCAACTCA D11S4463F AAAATTCTTGGCATCAACTCA D11S4463R AGGAGGAACTTAGCCTTAGAGC D17S1301F AGAGCAAGGTTCTGCCTTAGA D17S1301R GTGTATAACAAAATTCCTATGATGG D9S1122F GGCTTCGCACCAAGACTCCAT D9S1122R CGAGCACCCAAAGACACCAAT D2S441F ATTGGGGCAGGTGAAAGGAGT D2S441R AATTGGAGCTAAGTGGCTGTGGT D6S474F TGATAGGCTGTCTGCAAGCTG D6S474R AGGGTTCTCAAAACTGAGGGT D10S1248F CAATTTCCATGTATCAAGTTCTGTG D10S1248R ATGCTAAAACCTCTGTATCCC。 2.根据权利要求1所述的复合扩增体系，其特征在于，所述复合扩增体系还包括1对能扩增性别识别位点Amelogenin的引物，其序列为： AMEL-F TCCCTGGGCTCTGTAAAGAATA； AMEL-R GATCAGAGCTTAAACTGGGAAG。 3.根据权利要求2所述的复合扩增体系，所述复合扩增体系中的被扩增位点分别由四种颜色的荧光标记，相同荧光标记视为同一组，四组组合分别为： 第一组D2S1776、D18S853、D12S391、D1S1677、D1GATA113和D14S1434； 第二组AMEL、D1S1656、D22S1045、D1S1627、D6S1017和D7S1517； 第三组D4S2408、D3S4529、D3S1744、D12ATA63、D20S482和D11S4463； 第四组D17S1301、D9S1122、D2S441、D6S474和D10S1248。 4.根据权利要求3所述的复合扩增体系，第一组的标记为FAM标记，第二组的标记为HEX标记，第三组的标记为TAMRA标记，第四组的标记为ROX标记。 5.根据权利要求1或2所述的复合扩增体系，所述扩增体系还包括PCR缓冲液、模板DNA和Taq DNA聚合酶。 6.根据权利要求5所述的复合扩增体系，所述PCR缓冲液成分包括：10mM的硫酸铵，10mM的氯化钾，50mM的pH8.3的Tris-HCl，2mM的镁离子和0.2mM的dNTP，所述Taq DNA聚合酶用量为2U。 7.根据权利要求5所述的复合扩增体系，其特征在于，所述模板DNA来自于人类的骨骼、唾液、血液、毛发或精斑。 8.根据权利要求2所述的复合扩增体系，所述扩增体系扩增时的反应条件为： 第1步：95℃变性10分钟，第2步：94℃变性30秒，第3步59℃退火1分钟，第4步：72℃延伸1分钟，重复2至4步28次，最后60℃延伸30分钟。 9.一种试剂盒，包括权利要求1-8任一项所述的复合扩增体系。 10.权利要求1-8任一项所述的扩增体系或权利要求9所述的试剂盒在个体识别、亲子鉴定中的应用。