amt基因、突变株M107在表达固氮菌嗜铁素中的应用
本发明涉及生物工程技术领域，尤其是涉及amt基因、突变株M107在表达固氮菌嗜铁素中的应用。本发明利用Tn5转座技术，通过构建突变体库，筛选出嗜铁素合成能力较野生株GXGL‑4A显著提高的突变株M107。突变株M107的插入位点为氨甲基转移酶基因amt。通过CAS平板检测和嗜铁素相对含量测定，确认目标突变株M107嗜铁素产量较野生株显著提高，并且细菌生长不受影响；对黄瓜的促生实验表明获得的高产嗜铁素突变株对黄瓜有显著的促进生长效果。与现有技术相比，本发明通过对固氮菌的amt基因进行突变，显著提高了该菌嗜铁素产率，所得到的突变株可用作植物促生菌，在保持固氮活性的同时，增加对土壤中铁的吸收。
发明专利
CN202211111251.8
2022-09-13
CN115927234A
2023-04-07
C12N9/10(2006.01)
上海交通大学
陈云鹏;冯保云;章梦婷
200240 上海市闵行区东川路800号
上海科盛知识产权代理有限公司
褚明伟
上海;31
1.一种目的基因在表达固氮菌嗜铁素中的应用，其特征在于，所述目的基因为amt基因，所述amt基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。 2.突变株M107在表达固氮菌嗜铁素中的应用，其特征在于，所述突变株M107的保藏编号为CGMCC No.24401。 3.根据权利要求2所述的突变株M107在表达固氮菌嗜铁素中的应用，其特征在于，所述突变株M107在表达固氮菌嗜铁素以促进植物生长的应用方法包括以下步骤： (1)将突变株M107接种至LB培养基中，过夜培养后收集突变株M107细胞沉淀； (2)将步骤(1)收集的突变株M107细胞沉淀后处理后施放至植物根际。 4.根据权利要求3所述的突变株M107在表达固氮菌嗜铁素中的应用，其特征在于，步骤(1)中，将突变株M107以1％接种量接种至LB培养基中。 5.根据权利要求3所述的突变株M107在表达固氮菌嗜铁素中的应用，其特征在于，步骤(2)中，所述后处理为将突变株M107细胞沉淀重悬于无菌水后离心，该过程重复多次，将最后一次离心得到的突变株M107细胞沉淀重悬于无菌水中得到突变株M107细胞悬液。 6.根据权利要求5所述的突变株M107在表达固氮菌嗜铁素中的应用，其特征在于，植物处于两叶一心期时施放突变株M107细胞悬液。 7.根据权利要求6所述的突变株M107在表达固氮菌嗜铁素中的应用，其特征在于，每棵植物释放5-10mL突变株M107细胞悬液，细菌数为1×108CFU/mL；频率为每5天施用1次，连续处理5次。 8.敲除或替换目的基因的物质在制备高产嗜铁素固氮菌菌剂或产嗜铁素的促生菌菌剂中的应用，其特征在于，所述目的基因为amt基因，所述amt基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。 9.突变株M107在制备高产嗜铁素固氮菌菌剂或产嗜铁素的促生菌菌剂中的应用，其特征在于，所述突变株M107的保藏编号为CGMCC No.24401。 10.突变株M107，其特征在于，所述突变株M107的保藏编号为CGMCC No.24401。