AML相关的lncRNA标志物、检测试剂盒及方法在AML诊断与预后中的应用
本发明公开了一种与AML相关的LncRNA标志物，其特征在于，所述的LncRNA标志物为LncRNA FOXN3‑AS1，所述LncRN A FOXN3‑AS1的核苷酸序列如SEQ IDNO：1所示。本发明还公开了检测试剂盒及方法在AML诊断与预后中的应用。本发明的lncRNA FOXN3‑AS1作为AML临床检测的辅助诊断标志物的具有操作简单、成本低、检测精确，适合临床筛查的优势。本发明提供的标记物可应用于制备AML早期评估产品中，有利于进一步阐明AML发病机制，并为发现具有潜在治疗价值的新型小分子药物靶标提供帮助。
发明专利
CN202211003256.9
2022-08-19
CN116004819A
2023-04-25
C12Q1/6886(2018.01)
安徽同科生物科技有限公司
袁奕;方军;尚晓喻;何胜祥
237371 安徽省六安市金寨县现代产业园区金梧桐创业园A7楼
北京从真律师事务所
程义贵
安徽;34
1.一种与AML相关的LncRNA标志物，其特征在于，所述的LncRNA标志物为LncRNAFOXN3-AS1，所述LncRNA FOXN3-AS1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。 2.根据权利要求1所述的与AML相关的LncRNA标志物，其特征在于，对所述LncRNAFOXN3-AS1具有检测特异性的引物序列如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示。 3.权利要求1所述的LncRNA标志物的应用，其特征在于，所述的LncRNA标志物在制备AML诊断与预后试剂盒中的应用。 4.一种AML诊断与预后试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于检测急性髓系白血病组织中标志物LncRNA FOXN3-AS1的相对表达量，所述试剂盒包括引物对，所述引物对包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。 5.根据权利要求4所述的AML诊断与预后试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括qPCR扩增Mix和ddH2O。 6.根据权利要求5所述的AML诊断与预后试剂盒，其特征在于，所述qPCR扩增Mix包含SYBGREEN染料。 7.根据权利要求4所述的AML诊断与预后试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包扩内标系统，所示内标系统是根据内参基因GAPDH序列设计的内标引物，所述内标引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述下游引物的核酸序列如SEQ ID NO.5所示。 8.权利要求4所述的AML诊断与预后试剂盒检测AML标志物LncRNA FOXN3-AS1的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤： S1、细胞培养：人永生化骨髓细胞株HS-5、人急性髓系白血病细胞株(MOLM-13、HL-60、KG1A)，使用含10％胎牛血清和1％双抗的培养基DMEM在37℃、5％CO2、相对湿度为90％的培养箱中培养，2-3天换液1次； S2、RNA的提取：收集培养的细胞，按照总RNA提取试剂盒说明书指示操作进行细胞总RNA提取； S3、RNA的逆转录：按照HiFiScript cDNA第一链合成试剂盒说明书指示操作，进行反转录合成cDNA； S4、荧光定量PCR扩增：采用本发明所述的试剂盒，以步骤S3中获取的cDNA为模板，进行PCR扩增，并收集荧光信号； 荧光PCR扩增的体系组成及含量为： /> 荧光PCR的反应条件为：95℃预变性10min，然后以95℃变性15s、60℃退火30s、72℃延伸30s，共进行38个循环。