ADAR依赖性编辑组合物及其使用方法
本文中公开了用于募集和使用ADAR的组合物和方法。在一些方面中，公开了用于将ADAR活性靶向所期望的区域、序列或核苷酸的组合物和方法。在一些方面中，公开了用于提高定向ADAR编辑之效率的组合物和方法。
发明专利
CN202180067009.2
2021-07-30
CN116209762A
2023-06-02
C12N15/113(2006.01)
阿达尔克斯制药有限公司
李振;朱瑞;让·达席尔瓦科雷亚;金伯利·富尔茨;肖恩·斯蒂德;萨姆·李尔
美国加利福尼亚州
北京集佳知识产权代理有限公司
张福誉%刘振佳
美国;US
1.作用于核糖核酸(RNA)的腺苷脱氨酶(ADAR)募集分子，其包含双链RNA双链体，其中所述双链RNA双链体包含核苷酸数目相等的两条RNA链，所述两条RNA链不通过发夹彼此连接，其中： (a)每条RNA链的5’核苷酸与另一条RNA链的3’核苷酸互补； (b)所述双链RNA双链体的至少一条RNA链包含至少一个核苷修饰和/或至少一个骨架修饰；并且 (c)所述双链RNA双链体包含至少一个碱基对错配，其中所述错配不位于所述双链RNA双链体的任一末端核苷酸碱基对处。 2.权利要求1所述的ADAR募集分子，其还包含单链指导核酸。 3.权利要求1或权利要求2所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体包含至少一个核苷修饰和至少一个骨架修饰。 4.权利要求1至3中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体的至少一个核苷修饰包含2’-氨乙基、2’-脱氧-2’-氟-β-d-阿拉伯糖核酸、2’-O-甲基、2’-O-甲氧基乙基(2’O-MOE)或2’-氟修饰。 5.权利要求1至4中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体的至少一个骨架修饰包含硫代磷酸酯修饰。 6.权利要求1至5中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体的至少一个骨架修饰位于其所处RNA链的末端核苷酸的1至5个核苷酸之内。 7.权利要求1至6中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体的至少一个骨架修饰位于其所处RNA链的末端核苷酸的1至3个核苷酸之内。 8.权利要求1至7中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体的至少一个骨架修饰位于其所处RNA链的末端核苷酸的1个核苷酸之内。 9.权利要求1至8中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体包含多于一个核苷修饰。 10.权利要求1至9中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体包含多于两个核苷修饰。 11.权利要求1至10中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体中超过25％的核苷包含核苷修饰。 12.权利要求1至11中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体中超过50％的核苷包含核苷修饰。 13.权利要求1至12中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体中超过75％的核苷包含核苷修饰。 14.权利要求1至13中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体包含多于一个骨架修饰。 15.权利要求1至14中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体包含多于两个骨架修饰。 16.权利要求1至15中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体包含多于三个骨架修饰。 17.权利要求1至16中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体中超过25％的核苷间键联包含修饰。 18.权利要求1至17中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体中超过50％的核苷间键联包含修饰。 19.权利要求1至18中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体中超过75％的核苷间键联包含修饰。 20.权利要求1至19中任一项所述的ADAR募集分子，其还包含与所述双链RNA双链体的RNA链中至少一者的3’端或5’端连接的核苷酸，从而产生3’端或5’端突出端。 21.权利要求1至20中任一项所述的ADAR募集分子，其还包含另外的部分。 22.权利要求1至21中任一项所述的ADAR募集分子，其还包含接头。 23.权利要求2至22中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸为指导核糖核酸(gRNA)。 24.权利要求2至23中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸包含至少一个核苷修饰。 25.权利要求2至23中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸包含至少一个骨架修饰。 26.权利要求2至25中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸包含至少一个核苷修饰和至少一个骨架修饰。 27.权利要求2至26中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸包含至少两个核苷修饰。 28.权利要求2至27中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸包含至少三个核苷修饰。 29.权利要求2至28中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸中超过25％的核苷包含核苷修饰。 30.权利要求2至29中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸中超过50％的核苷包含核苷修饰。 31.权利要求2至30中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸中超过75％的核苷包含核苷修饰。 32.权利要求2至31中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸包含至少一个骨架修饰。 33.权利要求2至32中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸包含至少两个骨架修饰。 34.权利要求2至33中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸包含至少三个骨架修饰。 35.权利要求2至34中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸中超过25％的核苷间键联包含磷酸酯修饰。 36.权利要求2至35中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸中超过50％的核苷间键联包含磷酸酯修饰。 37.权利要求2至36中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸中超过75％的核苷间键联包含磷酸酯修饰。 38.权利要求2至37中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸包含与靶序列杂交的足够互补性。 39.权利要求2至38中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸包含三个连续的未经修饰核苷酸。 40.权利要求39所述的ADAR募集分子，其中所述三个连续的未经修饰核苷酸中的至少一者与和所述靶序列中靶腺苷相邻的核苷酸配对。 41.权利要求40所述的ADAR募集分子，其中所述三个连续的未经修饰核苷酸的中间核苷酸与所述靶腺苷相对。 42.权利要求2至41中任一项所述的ADAR募集分子，其中与靶腺苷相对的核苷酸包含： (a)胞嘧啶(C)； (b)不与腺苷(A)发生碱基配对的天然或经修饰核苷酸；和/或 (c)与鸟嘌呤(G)或肌苷(I)发生碱基配对的天然或经修饰核苷酸。 43.权利要求1至42中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体的每条RNA链的长度为至少10个核苷酸。 44.权利要求1至43中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体的每条RNA链的长度小于或等于100个核苷酸。 45.权利要求1至44中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体的每条RNA链的长度为约5个至约80个核苷酸。 46.权利要求1至45中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体的每条RNA链的长度为约5个至约60个核苷酸。 47.权利要求1至46中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体的每条RNA链的长度为约5个至约40个核苷酸。 48.权利要求1至47中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体的每条RNA链的长度为约5个至约30个核苷酸。 49.权利要求1至48中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体的每条RNA链的长度为约10个至约27个核苷酸。 50.权利要求1至49中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述双链RNA双链体的每条RNA链的长度为约15个至约26个核苷酸。 51.权利要求2至50中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸的长度为至少5个核苷酸。 52.权利要求2至51中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸的长度小于或等于100个核苷酸。 53.权利要求2至52中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸的长度为约5个至约80个核苷酸。 54.权利要求2至53中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸的长度为约5个至约60个核苷酸。 55.权利要求2至54中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸的长度为约5个至约40个核苷酸。 56.权利要求2至55中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸的长度为约5个至约30个核苷酸。 57.权利要求2至56中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸的长度为约10个至约27个核苷酸。 58.权利要求2至57中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸的长度为约15个至约26个核苷酸。 59.权利要求2至58中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸包含至少25％的与靶序列的互补性。 60.权利要求2至59中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸包含至少50％的与靶序列的互补性。 61.权利要求2至60中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸包含至少75％的与靶序列的互补性。 62.权利要求2至61中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸包含至少90％的与靶序列的互补性。 63.权利要求2至62中任一项所述的ADAR募集分子，其中所述单链指导核酸包含至少95％的与靶序列的互补性。 64.RNA靶向分子，其包含： (a)双链RNA双链体，其中所述双链RNA双链体包含核苷酸数目相等的两条RNA链，所述两条RNA链不通过发夹彼此连接，其中每条RNA链的5’核苷酸与另一条RNA链的3’核苷酸互补，其中所述双链RNA双链体包含至少一个碱基对错配，其中所述错配不位于所述双链RNA双链体的任一末端核苷酸碱基对处；以及 (b)单链指导核酸。 65.权利要求64所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体包含至少一个核苷修饰和/或至少一个骨架修饰。 66.权利要求64或权利要求65所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体包含至少一个核苷修饰和至少一个骨架修饰。 67.权利要求64至66中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述至少一个核苷修饰包含2’-氨乙基、2’-脱氧-2’-氟-β-d-阿拉伯糖核酸、2’-O-甲基、2’-O-甲氧基乙基(2’O-MOE)或2’-氟修饰。 68.权利要求64至67中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述至少一个骨架修饰包含硫代磷酸酯修饰。 69.权利要求64至68中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体的至少一个骨架修饰位于其所处RNA链的末端核苷酸的1至5个核苷酸之内。 70.权利要求64至69中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体的至少一个骨架修饰位于其所处RNA链的末端核苷酸的1至3个核苷酸之内。 71.权利要求64至70中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体的至少一个骨架修饰位于其所处RNA链的末端核苷酸的1个核苷酸之内。 72.权利要求64至71中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体包含多于一个核苷修饰。 73.权利要求64至72中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体包含多于两个核苷修饰。 74.权利要求64至73中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体中超过25％的核苷包含核苷修饰。 75.权利要求64至74中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体中超过50％的核苷包含核苷修饰。 76.权利要求64至75中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体中超过75％的核苷包含核苷修饰。 77.权利要求64至76中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体包含多于一个骨架修饰。 78.权利要求64至77中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体包含多于两个骨架修饰。 79.权利要求64至78中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体包含多于三个骨架修饰。 80.权利要求64至79中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体中超过25％的核苷间键联包含修饰。 81.权利要求64至80中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体中超过50％的核苷间键联包含修饰。 82.权利要求64至81中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体中超过75％的核苷间键联包含修饰。 83.权利要求64至82中任一项所述的RNA靶向分子，其还包含与所述双链RNA双链体的RNA链中至少一者的3’端或5’端连接的核苷酸，从而产生3’端和/或5’端突出端。 84.权利要求64至83中任一项所述的RNA靶向分子，其还包含另外的部分。 85.权利要求64至84中任一项所述的RNA靶向分子，其还包含接头。 86.权利要求64至85中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸为指导核糖核酸(gRNA)。 87.权利要求64至86中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸包含至少一个核苷修饰。 88.权利要求64至87中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸包含至少一个骨架修饰。 89.权利要求64至88中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸包含至少一个核苷修饰和至少一个骨架修饰。 90.权利要求64至89中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸包含至少两个核苷修饰。 91.权利要求64至90中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸包含至少三个核苷修饰。 92.权利要求64至91中任一项所述的RNA靶向分子，所述单链指导核酸中超过25％的核苷包含核苷修饰。 93.权利要求64至92中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸中超过50％的核苷包含核苷修饰。 94.权利要求64至93中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸中超过75％的核苷包含核苷修饰。 95.权利要求64至94中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸包含至少一个骨架修饰。 96.权利要求64至95中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸包含至少两个骨架修饰。 97.权利要求64至96中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸包含至少三个骨架修饰。 98.权利要求64至97中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸中超过25％的核苷间键联包含磷酸酯修饰。 99.权利要求64至98中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸中超过50％的核苷间键联包含磷酸酯修饰。 100.权利要求64至99中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸中超过75％的核苷间键联包含磷酸酯修饰。 101.权利要求64至100中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸包含与靶序列杂交的足够互补性。 102.权利要求64至101中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸包含三个连续的未经修饰核苷酸。 103.权利要求102所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸的三个连续的未经修饰核苷酸中的至少一者与和所述靶序列中靶腺苷相邻的核苷酸互补。 104.权利要求102或权利要求103所述的RNA靶向分子，其中所述三个连续的未经修饰核苷酸的中间核苷酸与所述靶腺苷相对。 105.权利要求64至104中任一项所述的RNA靶向分子，其中与靶腺苷相对的核苷酸包含： (a)胞嘧啶(C)； (b)不与腺苷(A)发生碱基配对的天然或经修饰核苷酸；和/或 (c)与鸟嘌呤(G)或肌苷(I)发生碱基配对的天然或经修饰核苷酸。 106.权利要求64至105中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体的每条RNA链的长度为至少5个核苷酸。 107.权利要求64至106中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体的每条RNA链的长度小于或等于100个核苷酸。 108.权利要求64至107中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体的每条RNA链的长度为约5个至约80个核苷酸。 109.权利要求64至108中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体的每条RNA链的长度为约5个至约60个核苷酸。 110.权利要求64至109中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体的每条RNA链的长度为约5个至约40个核苷酸。 111.权利要求64至110中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体的每条RNA链的长度为约5个至约30个核苷酸。 112.权利要求64至111中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体的每条RNA链的长度为约10个至约27个核苷酸。 113.权利要求64至112中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体的每条RNA链的长度为约15个至约26个核苷酸。 114.权利要求64至113中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸的长度为至少5个核苷酸。 115.权利要求64至114中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸的长度小于或等于100个核苷酸。 116.权利要求64至115中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸的长度为约5个至约80个核苷酸。 117.权利要求64至116中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸的长度为约5个至约60个核苷酸。 118.权利要求64至117中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸的长度为约5个至约40个核苷酸。 119.权利要求64至118中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸的长度为约5个至约30个核苷酸。 120.权利要求64至119中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸的长度为约10个至约27个核苷酸。 121.权利要求64至120中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸的长度为约15个至约26个核苷酸。 122.权利要求64至121中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸包含至少25％的与靶序列的互补性。 123.权利要求64至122中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸包含至少50％的与靶序列的互补性。 124.权利要求64至123中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸包含至少75％的与靶序列的互补性。 125.权利要求64至124中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸包含至少90％的与靶序列的互补性。 126.权利要求64至125中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸包含至少95％的与靶序列的互补性。 127.在对象中使靶核酸脱氨基的方法，其包括施用有效量的权利要求2至63中任一项所述的ADAR募集分子和/或权利要求64至126中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述ADAR募集分子和/或所述RNA靶向分子包含单链指导核酸，所述单链指导核酸包含与靶序列足够互补以与所述靶序列杂交的序列。 128.权利要求127所述的方法，其中所述靶序列包含靶腺苷。 129.治疗对象的方法，其包括施用权利要求2至63中任一项所述的ADAR募集分子和/或权利要求64至126中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述ADAR募集分子和/或所述RNA靶向分子包含单链指导核酸，所述单链指导核酸包含与靶序列足够互补以与所述靶序列杂交的序列。 130.权利要求129所述的方法，其中所述靶序列包含靶腺苷。 131.权利要求130所述的方法，其中所述靶腺苷与疾病或病症相关，其中所述靶腺苷的脱氨基治疗所述疾病或病症。 132.权利要求131所述的方法，其中所述疾病或病症选自：囊性纤维化、Hurler综合征、α-1-抗胰蛋白酶(A1AT)缺乏症、帕金森病、阿尔茨海默病、白化病、肌萎缩侧索硬化、哮喘、β型地中海贫血(β-地中海贫血)、Cadasil综合征、夏科-马里-图思病、慢性阻塞性肺病(COPD)、远端型脊髓性肌萎缩(DSMA)、迪谢内/贝克肌营养不良、营养不良型大疱性表皮松解、大疱性表皮松解、法布里病、因子V莱登相关病症、家族性腺瘤性息肉病、半乳糖血症、戈谢病、葡糖-6-磷酸脱氢酶、血友病、遗传性血色病、亨特综合征、亨廷顿病、炎性肠病(IBD)、遗传性多凝集反应综合征、莱伯氏先天性黑蒙症、莱施-奈恩综合征、林奇综合征、马方综合征、黏多糖贮积症、肌营养不良、I型和II型强直性肌营养不良、神经纤维瘤病、A型、B型和C型尼曼-皮克病、NY-eso1相关癌症、波伊茨-耶格综合征、苯丙酮尿症、庞贝氏病、原发性纤毛病、凝血酶原突变相关病症例如凝血酶原G20210A突变、肺动脉高压、视网膜色素变性、桑德霍夫病、重症联合免疫缺陷综合征(SCID)、镰状细胞贫血、脊髓性肌萎缩、斯特格氏病、泰-萨克斯病、厄舍综合征、X连锁免疫缺陷、斯德奇-韦伯综合征和癌症。 133.RNA靶向分子，其包含： (a)含有两条RNA链的双链RNA双链体； (b)单链指导核酸；以及 (c)接头； 其中所述双链RNA双链体经由所述接头与所述单链指导核酸连接。 134.权利要求133所述的RNA靶向分子，其中所述接头与所述RNA双链体的两条链中一者的5’末端核苷酸连接。 135.权利要求133所述的RNA靶向分子，其中所述接头与所述RNA双链体的两条链中一者的3’末端核苷酸连接。 136.权利要求133所述的RNA靶向分子，其中所述接头与位于所述RNA双链体的两条链中一者的5’末端核苷酸与3’末端核苷酸之间的核苷酸连接。 137.权利要求133所述的RNA靶向分子，其中所述接头与所述指导核酸的5’核苷酸连接。 138.权利要求133所述的RNA靶向分子，其中所述接头与所述指导核酸的3’核苷酸连接。 139.权利要求133所述的RNA靶向分子，其中所述接头与位于所述指导核酸的5’末端核苷酸与3’末端核苷酸之间的核苷酸连接。 140.权利要求133所述的RNA靶向分子，其中所述接头与所述RNA双链体的一条链的5’末端核苷酸的糖或者3’末端核苷酸的3’羟基或糖连接。 141.权利要求133所述的RNA靶向分子，其中所述接头与所述指导核酸的5’末端核苷酸的糖或者3’末端核苷酸的3’羟基或糖连接。 142.权利要求133所述的RNA靶向分子，其中所述接头与所述RNA双链体的一条RNA链的核苷间键联连接。 143.权利要求133所述的RNA靶向分子，其中所述接头与所述指导核酸的核苷间键联连接。 144.权利要求133所述的RNA靶向分子，其中所述接头与所述RNA双链体的一条RNA链的核苷糖连接。 145.权利要求133所述的RNA靶向分子，其中所述接头与所述指导核酸的核苷糖连接。 146.权利要求133所述的RNA靶向分子，其中所述接头将所述指导核酸的3’端与所述RNA双链体的一条RNA链的5’端连接。 147.权利要求133所述的RNA靶向分子，其中所述接头将所述指导核酸的5’端与所述RNA双链体的一条RNA链的3’端连接。 148.权利要求133所述的RNA靶向分子，其中所述接头将所述指导核酸的3’端与所述RNA双链体的一条RNA链的3’端连接。 149.权利要求133所述的RNA靶向分子，其中所述接头将所述指导核酸的5’端与所述RNA双链体的一条RNA链的5’端连接。 150.权利要求133所述的RNA靶向分子，其中所述接头将所述指导核酸的3’端与位于所述RNA双链体的一条RNA链的5’末端核苷酸与3’末端核苷酸之间的核苷酸连接。 151.权利要求150所述的RNA靶向分子，其中所述接头与所述RNA双链体的一条RNA链的核苷间键联或核苷糖连接。 152.权利要求133所述的RNA靶向分子，其中所述接头将所述指导核酸的5’端与位于所述RNA双链体的一条RNA链的5’末端核苷酸与3’末端核苷酸之间的核苷酸连接。 153.权利要求152所述的RNA靶向分子，其中所述接头与所述RNA双链体的一条RNA链的核苷间键联或核苷糖连接。 154.权利要求133所述的RNA靶向分子，其中所述接头将所述RNA双链体的一条RNA链的3’端与位于所述指导核酸的5’末端核苷酸与3’末端核苷酸之间的核苷酸连接。 155.权利要求154所述的RNA靶向分子，其中所述接头与所述指导核酸的核苷间键联或核苷糖连接。 156.权利要求133所述的RNA靶向分子，其中所述接头将所述RNA双链体的一条RNA链的5’端与位于所述指导核酸的5’末端核苷酸与3’末端核苷酸之间的核苷酸连接。 157.权利要求156所述的RNA靶向分子，其中所述接头与所述指导核酸的核苷间键联或核苷糖连接。 158.权利要求133或任何其他先前权利要求所述的RNA靶向分子，其中所述接头为无分支接头。 159.权利要求133或任何其他先前权利要求所述的RNA靶向分子，其中所述接头为分支接头。 160.权利要求133或任何其他先前权利要求所述的RNA靶向分子，其中所述接头为非共价接头，其包含与所述双链RNA双链体的一条链共价连接的第一结合配偶体和与所述单链指导核酸共价连接的第二结合配偶体，其中所述第一结合配偶体和所述第二结合配偶体形成使所述双链RNA双链体与所述单链指导核酸连接的非共价复合物。 161.权利要求160所述的RNA靶向分子，其中所述第一结合配偶体为受体，并且所述第二结合配偶体为对所述受体具有特异性的配体。 162.权利要求160所述的RNA靶向分子，其中所述第二结合配偶体为受体，并且所述第一结合配偶体为对所述受体具有特异性的配体。 163.权利要求160所述的RNA靶向分子，其中所述第一结合配偶体为生物素，并且所述第二结合配偶体为链霉亲和素。 164.权利要求160所述的RNA靶向分子，其中所述第一结合配偶体为链霉亲和素，并且所述第二结合配偶体为生物素。 165.权利要求133或任何其他先前权利要求所述的RNA靶向分子，其中所述接头为共价接头。 166.权利要求133或任何其他先前权利要求所述的RNA靶向分子，其中所述接头的长度大于或等于4个原子。 167.权利要求133或任何其他先前权利要求所述的RNA靶向分子，其中所述接头的长度小于或等于180个原子。 168.权利要求165所述的RNA靶向分子，其中所述接头包含烷基、烯基、炔基、经取代烷基、经取代烯基、经取代炔基、重复的乙二醇基团、醚、硫醚、脲、碳酸酯、胺、酰胺、马来酰亚胺-硫醚、二硫化物、磷酸二酯、磺酰胺键联、点击反应的产物、来自叠氮化物-炔环加成的三唑、氨基甲酸酯、可切割接头、氧化还原可切割接头、还原可切割接头、二硫化物基团、酸可切割接头、腙基、酯基、缩醛基、缩酮基、酯酶可切割接头、酯基、磷酸酶可切割接头、磷酸基、肽酶可切割接头、肽键、生物可切割接头、DNA、RNA、二硫化物、酰胺、官能化的单糖、或半乳糖胺的寡糖。 169.权利要求165所述的RNA靶向分子，其中所述接头包含来源于点击化学反应的部分。 170.权利要求169所述的RNA靶向分子，其中所述来源于点击化学反应的部分为三唑、二唑、二嗪、硫化物键、马来酰亚胺环、琥珀酰亚胺环、酯或酰胺。 171.权利要求165所述的RNA靶向分子，其中所述接头包含一个或更多个氨基酸。 172.权利要求165所述的RNA靶向分子，其中所述接头包含有机分子、基团、聚合物或化学结构域。 173.权利要求172所述的RNA靶向分子，其中所述化学结构域包含酰胺、脲、氨基甲酸酯、碳酸酯、酯、缩醛、缩酮、亚磷酰胺、腙、亚胺、肟、二硫化物、甲硅烷基、肼、腙、硫醇、咪唑、碳-碳键、碳-杂原子键或偶氮结构域。 174.权利要求165所述的RNA靶向分子，其中所述接头为聚合物。 175.权利要求174所述的RNA靶向分子，其中所述聚合物接头包含聚乙烯、聚乙二醇、聚酰胺、聚酯或聚醚。 176.权利要求133或任何其他先前权利要求所述的RNA靶向分子，其中所述接头包含式(I)至式(VII)中任一者。 177.权利要求133或任何其他先前权利要求所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体包含： (a)含有与链编号:24或27具有至少70％同一性的序列的RNA链；和 (b)含有与链编号:25或28具有至少70％同一性的序列的RNA链； 并且其中所述单链指导核酸包含与链编号:23或26具有至少70％同一性的序列。 178.权利要求133或任何其他先前权利要求所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体包含： (a)含有根据链编号:24或27的序列的RNA链；和 (b)含有根据链编号:25或28的序列的RNA链； 并且其中，至少一个单链指导核酸包含根据链编号:23或26的序列。 179.权利要求133至176中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体包含： (a)含有与链编号:353或355具有至少70％同一性的序列的RNA链；和 (b)含有与链编号:815或818具有至少70％同一性的序列的RNA链。 180.权利要求133至176中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体包含： (a)含有根据链编号:353或355的序列的RNA链；和 (b)含有根据链编号:815或818的序列的RNA链。 181.权利要求133至176中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体包含： (a)含有与链编号:641或643具有至少70％同一性的序列的RNA链；和 (b)含有与链编号:841或869具有至少70％同一性的序列的RNA链。 182.权利要求133至176中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体包含： (a)含有根据链编号:641或643的序列的RNA链；和 (b)含有根据链编号:841或869的序列的RNA链。 183.权利要求133或任何其他先前权利要求所述的RNA靶向分子，其包含两个或更多个双链RNA双链体。 184.权利要求133或任何其他先前权利要求所述的RNA靶向分子，其包含两个或更多个单链指导核酸。 185.权利要求133或任何其他先前权利要求所述的RNA靶向分子，其包含2个至10个双链RNA双链体。 186.权利要求133或任何其他先前权利要求所述的RNA靶向分子，其包含2个至10个单链指导核酸。 187.权利要求133或任何其他先前权利要求所述的RNA靶向分子，其包含2个至5个双链RNA双链体。 188.权利要求133或任何其他先前权利要求所述的RNA靶向分子，其包含2至5个单链指导核酸。 189.权利要求133至188中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体的一条链不与所述RNA双链体的另一条链共价连接。 190.权利要求133至189中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体不包含将所述RNA双链体的一条链与所述RNA双链体的另一条链连接的发夹。 191.权利要求133至190中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体包含具有相等数目的核苷酸的两条RNA链。 192.权利要求133至191中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体包含具有不同数目的核苷酸的两条RNA链。 193.权利要求133至192中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述接头不包含核苷酸或核苷。 194.权利要求133至193中任一项所述的RNA靶向分子，其中所述接头为非核酸接头。 195.RNA靶向分子，其包含： (a)含有两条RNA链的第一双链RNA双链体； (b)含有两条RNA链的第二双链RNA双链体； (b)单链指导核酸；以及 (c)接头； 其中所述第一双链RNA双链体经由所述接头与所述第二双链RNA双链体连接。 196.RNA靶向分子，其包含： (a)含有两条RNA链的双链RNA双链体； (b)第一单链指导核酸； (c)第二单链指导核酸；以及 (c)接头； 其中所述第一单链指导核酸经由所述接头与所述第二单链指导核酸连接。 197.权利要求133或任何其他先前权利要求所述的RNA靶向分子，其中所述双链RNA双链体包含至少一个错配。 198.权利要求133或任何其他先前权利要求所述的RNA靶向分子，其中所述单链指导核酸相对于靶序列包含至少两个错配。