J亚群禽白血病病毒gp85基因重组原核表达蛋白及其纯化方法和应用

摘要：

本发明公开了一种J亚群禽白血病病毒gp85基因重组原核表达蛋白及其纯化方法和应用，包括下列步骤：（1）设计并合成扩增gp85基因的特异性引物（2）PCR扩增获得gp85基因片段并纯化；（3）将gp85基因克隆至pET‑32a原核表达载体，筛选阳性克隆后测序鉴定；（4）重组表达载体pET‑32a‑gp85的表达；（5）尿素法纯化表达的gp85蛋白；（6）重组gp85蛋白的复性。利用本发明的方法获得了高纯度的可溶性gp85蛋白。表达的蛋白可作为包被抗原建立抗体检测方法，还可用于免疫动物制备抗血清，为免疫荧光、免疫组化、胶体金检测卡制备等提供原材料。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201810736332.4

申请日期：2018-07-06

公开/公告号：CN109022470A

公开/公告日：2018-12-18

主分类号：C12N15/70(2006.01)I

申请/专利权人:山东省滨州畜牧兽医研究院

发明/设计人:徐晴晴;王峰;沈志强

主申请人地址:256600 山东省滨州市黄河二路169号绿都生物高科技园区

专利代理机构:济南舜源专利事务所有限公司 37205

代理人:于晓晓

国别省市代码:山东;37

权利要求：

1.一种J亚群禽白血病病毒gp85基因重组原核表达蛋白的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）设计扩增gp85基因的特异性引物：ALV‑J‑F：5’‑ CG GGATCC GGAGTTCATCTGTTGCAACAACCAG‑3’ALV‑J‑R：5’‑ CCC AAGCTT TTA GCGCCTGCTACGGCGGTGAC‑3’；（2）PCR扩增获得gp85基因片段并纯化；（3）将gp85基因克隆至pET‑32a原核表达载体，筛选阳性克隆后测序鉴定；（4）重组表达载体pET‑32a‑gp85的表达；（5）尿素法纯化表达的gp85蛋白；（6）重组gp85蛋白的复性。