ddx19基因缺失斑马鱼突变体的制备方法

摘要：

本发明公开了一种斑马鱼ddx19基因缺失突变体的制备方法；包括如下步骤：确定ddx19基因敲除的靶点在斑马鱼ddx19基因第1个外显子上，设计gRNA序列；以pUC19‑‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑ddx19‑sfd、tracr rev进行PCR扩增；PCR产物进行纯化、体外转录获得gRNA；将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼胚胎一细胞期中，培养获得稳定遗传的ddx19基因突变体。本发明利用CRISPR/Cas9技术，获得可稳定遗传的ddx19基因缺失斑马鱼突变体。另外，本发明还公开了ddx19基因缺失斑马鱼突变体的表型，将为其生物学功能研究以及疾病建模提供基础支持。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201810527943.8

申请日期：2018-05-28

公开/公告号：CN108715862A

公开/公告日：2018-10-30

主分类号：C12N15/85(2006.01)I

申请/专利权人:上海海洋大学

发明/设计人:张庆华;时灿;岳倩文;李伟明

主申请人地址:201306 上海市浦东新区沪城环路999号

专利代理机构:上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227

代理人:曹莉

国别省市代码:上海;31

权利要求：

1.一种斑马鱼ddx19基因缺失突变体的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1、确定ddx19基因敲除的靶点在斑马鱼ddx19基因第1个外显子上，设计gRNA序列；S2、设计合成gRNA的上游引物T7‑ddx19‑sfd、下游引物tracr rev；S3、以pUC19‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑ddx19‑sfd、tracr rev进行PCR扩增；S4、对步骤S3的PCR产物进行体外转录，转化获得gRNA；S5、将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼中；S6、培养获得稳定遗传的斑马鱼ddx19基因突变体。