H7N9禽流感病毒HA蛋白重组杆状病毒表达载体及其构建方法

摘要：

本发明涉及H7N9禽流感病毒HA蛋白重组杆状病毒表达载体及其构建方法。利用昆虫杆状病毒表达系统表达H7N9禽流感病毒血凝素基因，获得重组HA蛋白，并验证其活性。结果显示：PCR结果显示重组杆状病毒表达载体的扩增产物大小约为4000bp，SDS‑PAGE电泳显示纯化的表达蛋白分子量为63KD，免疫印迹结果显示表达蛋白可以与特异性HA抗体进行反应，产生条带与理论大小相当。血凝试验结果显示表达的蛋白能使红细胞凝集。结论：禽流感H7N9的HA蛋白在重组杆状病毒中获得表达，并具有血凝活性。本发明为新型禽流感病毒安全、快速的检测提供新思路，也为进一步评估该蛋白用于快速筛选试剂的应用价值提供理论基础。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201810373348.3

申请日期：2018-04-24

公开/公告号：CN108384808A

公开/公告日：2018-08-10

主分类号：C12N15/866(2006.01)I

申请/专利权人:上海市静安区疾病预防控制中心

发明/设计人:王平;赵文良;蔡明毅;沈琦;任静

主申请人地址:200042 上海市静安区永和路195号

专利代理机构:上海卓阳知识产权代理事务所(普通合伙) 31262

代理人:周春洪

国别省市代码:上海;31

权利要求：

1.H7N9禽流感病毒HA蛋白重组杆状病毒表达载体，其特征在于，通过如下方法构建：合成H7N9禽流感病毒全长HA基因，利用以下特异性引物进行PCR扩增：5’‑AAATATGCGGCCGCATGAACACTCAAATCCTGGTATTCG‑3’作为上游引物；5’‑ACATGCATGCTTAGTGATGATGGTGGTGATGTATACAAATAGTGCACCG‑3’作为下游引物；PCR片段克隆到pFastBacⅠ载体中，构建重组杆状病毒表达载体。