CRISPR/Cas9技术介导山羊VEGF基因定点整合的方法

摘要：

本发明利用CRISPER/Cas9系统介导完成山羊VEGF基因定点整合，其是依据山羊的FGF5基因序列，构建基于CRISPER/Cas9系统的Cas9‑gRNA表达载体及VEGF打靶载体；然后将优化后的Cas9‑gRNA表达载体及VEGF打靶载体共同转染至山羊胎儿成纤维细胞中，获得VEGF基因在FGF5位点定点整合的细胞株。本发明所构建的基于CRISPER/Cas9系统的打靶载体为山羊VEGF基因定点整合及FGF5基因靶向敲除提供了一种简单快捷安全的途径。该方法在细胞株筛选过程中没有涉及任何筛选标记基因，从而大大提高了转基因动物的安全性，对山羊的遗传育种以及基因功能的研究具有重要价值。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201810266144.X

申请日期：2018-03-29

公开/公告号：CN108424931A

公开/公告日：2018-08-21

主分类号：C12N15/85(2006.01)I

申请/专利权人:内蒙古大学

发明/设计人:呼啸;刘东军;郝斐;高源;梁浩

主申请人地址:010021 内蒙古自治区呼和浩特市赛罕区大学西路235号

国别省市代码:内蒙古;15

权利要求：

1.CRISPR/Cas9技术介导山羊VEGF基因定点整合的方法，其特征在于，其是根据山羊的FGF5基因序列，构建基于CRISPER/Cas9系统的Cas9‑gRNA表达载体和VEGF打靶载体，然后将优化后的然后将优化后的Cas9‑gRNA表达载体及VEGF打靶载体共同转染至山羊胎儿成纤维细胞中，获得VEGF基因在FGF5位点定点整合的细胞株。