BTV-10型、20型、23型基因型分型的多重RT-PCR试剂盒及其检测方法

摘要：

本发明公开了一种用于蓝舌病病毒(BTV)10型、20型、23型基因分型的多重RT‑PCR试剂盒及其检测方法，用于单管同时鉴别检测蓝舌病病毒10型、20型、23型。本方法根据蓝舌病各基因型病毒VP2基因序列保守区设计了3对PCR特异性引物来构建多重RT‑PCR方法。利用优化的多重PCR体系及条件，可单管同时鉴别检测这3种基因型中的一种或多种，对BTV其它基因型及PPRV、FMDV核酸无特异性扩增，最低检测浓度可达到pg级。本发明建立了一种灵敏度高、特异性强、节时省力并且易于观察结果的RT‑PCR方法用于鉴别检测BTV‑10型、20型、23型。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201810247778.0

申请日期：2018-03-23

公开/公告号：CN108588275A

公开/公告日：2018-09-28

主分类号：C12Q1/70(2006.01)I

申请/专利权人:重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心

发明/设计人:聂福平;杨俊;王昱;黄秋华;李贤良;王国民

主申请人地址:400020 重庆市江北区红黄路8号

专利代理机构:重庆市恒信知识产权代理有限公司 50102

代理人:李金蓉

国别省市代码:重庆;50

权利要求：

1.BTV‑10型、20型、23型基因型分型的多重RT‑PCR试剂盒，其特征是：包括Mix Primer管、阳性对照管、阴性对照管和灭菌去离子水管，所述Mix Primer管由以下引物组成：DNA序列为SEQ ID NO.1的20μmol/L的BTV‑10上游引物1μL；DNA序列为SEQ ID NO.2的20μmol/L的BTV‑10下游引物1μL；DNA序列为SEQ ID NO.3的20μmol/L的BTV‑20上游引物0.2μL；DNA序列为SEQ ID NO.4的20μmol/L的BTV‑20下游引物0.2μL；DNA序列为SEQ ID NO.5的20μmol/L的BTV‑23上游引物0.2μL；DNA序列为SEQ ID NO.6的20μmol/L的BTV‑23下游引物0.2μL；合计2.8μL，为单次反应的用量；所述阳性对照管：管内为BTV‑10、BTV‑20、BTV‑23阳性重组质粒混合物；所述阴性对照管：管内为无BTV‑10、BTV‑20、BTV‑23牛肉肌肉组织DNA样品；所述灭菌去离子水管：500μL。