CRISPR‑Cas9靶向敲除人肠癌细胞RITA基因及其特异性的sgRNA
本发明公开了CRISPR/Cas9 靶向敲除人肠癌细胞RITA基因及其特异性sgRNA。首先是获得特异性靶向RITA 基因第二外显子的sgRNA,其碱基序列如SEQ ID NO.1 所示;其次是构建RITA基因的sgRNA到慢病毒载体系统,该系统含有Cas9 蛋白;最后将含有该sgRNA的CRISPR/Cas9慢病毒感染人肠癌HT‑29细胞,获得RITA蛋白表达水平显著降低的细胞株。本发明具有操作步骤简单、sgRNA靶向性好、且对RITA基因切割效率高;此外,所构建的CRISPR/Cas9慢病毒系统具有敲除效率高的优势,并能特异性敲除RITA基因,得到敲除RITA基因的人肠癌细胞,从而为进一步研究肠癌细胞中RITA的作用机制提供强有力的工具。
发明专利
CN201711143049.2
2017-11-17
CN107893075A
2018-04-10
C12N15/113(2010.01)I
和元生物技术(上海)股份有限公司
高玉涛;杨佳丽;杨兴林;潘讴东
201321 上海市浦东新区紫萍路908弄19号楼
上海;31
一种CRISPR/Cas9 靶向敲除人肠癌细胞RITA基因及其特异性的sgRNA,其特征在于,首先设计获得特异性靶向RITA 基因第二外显子的sgRNA;其次构建RITA基因的sgRNA到慢病毒载体系统;然后将此慢病毒载体系统感染人肠癌HT‑29细胞,得到的RITA基因敲除细胞株。