CRISPR/CAS9介导药物转运体靶向性敲除的caco‑2细胞模型及其方法

摘要：

本发明公开了CRISPR/CAS9介导药物转运体靶向性敲除的caco‑2细胞模型及其方法，该方法用于非诊断或治疗目的，包括如下步骤：对P‑gp、BCRP及MRP2转运体设计靶点特异性的sgRNA，设计的sgRNA序列如序列表中SEQ ID NO：1‑6所示，构建sgRNA表达载体；利用CRISPR/CAS9分别设计P‑gp、BCRP及MRP基因单敲除及两两组合双敲除，与hCas9质粒共转染caco‑2细胞，进行单克隆化扩大培养，即得转运体基因靶向性的caco‑2细胞模型。本发明获得的caco‑2细胞模型将有效排除不同转运体之间相互干扰，为药物转运研究提供更特异、更灵敏的细胞模型。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201710911586.0

申请日期：2017-09-29

公开/公告号：CN107760652A

公开/公告日：2018-03-06

主分类号：C12N5/10(2006.01)I

申请/专利权人:华南理工大学

发明/设计人:黄黎珍;钟国瑞;谢水林;庞土慧;姜二岗;邹淑香;李浩健;戴仁科

主申请人地址:510006 广东省广州市番禺区广州大学城华南理工大学

专利代理机构:广州粤高专利商标代理有限公司 44102

代理人:何淑珍

国别省市代码:广东;44

权利要求：

CRISPR/CAS9介导药物转运体靶向性敲除caco‑2细胞模型的方法，其特征在于，包括如下步骤：1）对P‑gp、BCRP及MRP2转运体设计靶点特异性的sgRNA，设计的sgRNA的序列如序列表中SEQ ID NO：1‑ SEQ ID NO：6所示，再构建sgRNA表达载体；2）利用CRISPR/CAS9分别设计P‑gp、BCRP及MRP基因单敲除及两两组合双敲除，与hCas9质粒共转染caco‑2细胞，进行单克隆化扩大培养，即得转运体基因靶向性的caco‑2细胞模型。