Fosmid 文库抗瓜类枯萎病活性产物筛选与鉴定方法

摘要：

本发明属于瓜类枯萎病防治技术领域，公开了一种Fosmid文库抗瓜类枯萎病活性产物筛选与鉴定方法，包括；异位裂解法提取土壤微生物基因组DNA；宏基因组Fosmid文库构建及质量检测；筛选宏基因组Fosmid表达文库，获得Fosmid活性克隆；萃取发酵液，获得较纯的活性层；获得纯化后的抗瓜类枯萎病活性物质；解析图谱，确定活性物质结构，验证化合物抗瓜类枯萎病的活性；筛选和改造植物内生菌株，基因转化到改造后的内生菌株，通过选择不同的启动子、不同的培养基和发酵条件，建立抗瓜类枯萎病药物基因的高效表达体系。本发明突破传统生防菌不能定植的瓶颈因素，大大加速抗瓜类枯萎病新药物的研制、开发和商品化进程。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201710757202.4

申请日期：2017-08-29

公开/公告号：CN107523562A

公开/公告日：2017-12-29

主分类号：C12N15/10(2006.01)I

申请/专利权人:海南省农业科学院植物保护研究所

发明/设计人:赵志祥;严婉荣;肖敏;陈绵才;曾向萍

主申请人地址:571100 海南省海口市琼山区流芳路9号

专利代理机构:北京国坤专利代理事务所(普通合伙) 11491

代理人:黄耀钧

国别省市代码:海南;66

权利要求：

一种Fosmid文库抗瓜类枯萎病活性产物筛选与鉴定方法，其特征在于，所述Fosmid文库抗瓜类枯萎病活性产物筛选与鉴定方法包括：(1)异位裂解法提取土壤微生物基因组DNA；(2)宏基因组Fosmid文库构建及质量检测；(3)筛选宏基因组Fosmid表达文库，获得Fosmid活性克隆；(4)萃取发酵液，获得较纯的活性层；获得纯化后的抗瓜类枯萎病活性物质；解析图谱，确定活性物质结构，验证化合物抗瓜类枯萎病的活性；(5)筛选和改造植物内生菌株，基因转化到改造后的内生菌株，通过选择不同的启动子、不同的培养基和发酵条件，建立抗瓜类枯萎病药物基因的高效表达体系。