HNP-1-Fc重组蛋白的制备方法及应用

摘要：

本发明公开了一种HNP-1-Fc重组蛋白的制备方法及应用，包括：构建HNP-1-Fc重组蛋白真核细胞表达载体、磷酸钙转染程序以及富集和纯化HNP-1-Fc重组蛋白。本发明构建的重组CHO-K1细胞生产效率高、产物浓度高且易于纯化，本制备方法费用低廉，具有极高的推广价值。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201510579633.7

申请日期：2015-09-14

公开/公告号：CN105132458A

公开/公告日：2015-12-09

主分类号：C12N15/85(2006.01)I

申请/专利权人:武汉市星熠艾克生物医药有限责任公司

发明/设计人:韩兵;王烁;冯玉冰;万君花

主申请人地址:430074 湖北省武汉市东湖开发区高新大道666号武汉国家生物产业基地项目B、C、D区研发楼B1栋

专利代理机构:北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙) 11369

代理人:张云花

国别省市代码:湖北;42

权利要求：

一种HNP?1?Fc重组蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、从人的单克隆抗体细胞中提取携带hlgG₂?Fc蛋白翻译信息的mRNA，以所述mRNA为模板合成cDNA；S2、合成携带hGHRH蛋白翻译信息的cDNA片段，并与步骤S1合成的cDNA连接，形成hGHRH/hIgG₂?Fc基因克隆片段；S3、合成包含Flag的HNP?1的cDNA片段：Flag/HNP?1，与步骤S2合成的基因克隆片段连接，形成hGHRH/hIgG₂?Fc/Flag/HNP?1基因克隆片段，将其定向克隆至真核细胞重组载体pMPGCR5B上，构建表达载体；S4、将所述表达载体转化至大肠杆菌中，用含有氨苄青霉素培养基筛选出阳性转化菌落，扩增阳性转化菌落并提取表达载体，并对表达载体进行酶切和测序鉴定，对测序后的表达载体进行纯化；S5、以纯化后的表达载体转染哺乳细胞CHO?K1中以得到表达细胞；S6、从所述表达细胞的培养基中纯化出HNP?1?Fc重组蛋白。