HNPCC外周血MLH1基因表达的实时荧光定量PCR检测方法
本发明公开了一种HNPCC外周血MLH1基因表达的实时荧光定量PCR检测方法,包括:1)设计引物和探针:上游引物如SEQ?ID?NO.1所示或其互补链;下游引物如SEQ?ID?NO.2所示或其互补链;探针如SEQ?ID?NO.3所示或其互补链;2)提取HNPCC外周血总RNA,逆转录合成cDNA第一链;3)采用步骤1)设计的引物和探针进行实时荧光定量PCR检测;4)将所得MLH1基因拷贝数与HBA2对照基因拷贝数相除来校正,得MLH1基因相对表达量。此外,本发明还公开了该方法的检测用引物和探针。本发明特异性强,灵敏度高,定量准确,检测成本低,可用于HNPCC初筛和辅助诊断。
发明专利
CN201510574221.4
2015-09-10
CN105154549A
2015-12-16
C12Q1/68(2006.01)I
泰州市人民医院
于鸿;朱莉;姜琳;盛海辉;王朝夫
225300 江苏省泰州市海陵区海陵南路399号
上海浦一知识产权代理有限公司 31211
王函
江苏;32
一种HNPCC外周血MLH1基因表达的实时荧光定量PCR检测方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)设计引物和探针;该引物的序列为:MLH1上游引物:5′?GTTCTCCGGGAGATGTTGCATA?3′,如SEQ?ID?NO.1所示或其互补链;MLH1下游引物:5′?TGGTGGTGTTGAGAAGGTATAACTTTG?3′,如SEQ?ID?NO.2所示或其互补链;该探针的序列为:MLH1TaqMan探针:F?CCTCAGTGGGCCTTGGCACAGC?P,如SEQ?ID?NO.3所示或其互补链;(2)提取HNPCC家系外周血总RNA,逆转录合成cDNA第一链;(3)采用步骤(1)设计的MLH1引物和探针进行实时荧光定量PCR检测,以保守基因HBA2作为对照;(4)将每一标本所得MLH1基因拷贝数与其相对应的HBA2基因拷贝数相除来校正不同标本之间RNA的质量和逆转录效率的差异,得出MLH1基因相对表达量;在符合Amsterdam?Ⅱ标准家系间,比较健康人与患者之间外周血MLH1基因表达水平差异。