CD28基因过表达载体及其应用

摘要：

本发明提供一种CD28基因过表达载体及其应用，所述过表达载体是以目标生物基因组为模板，PCR扩增ROSA26基因第一内含子的左、右同源臂，CD28基因表达框，OCT4基因启动子，然后将同源左臂，CD28基因表达框，含LoxP位点的OCT4基因启动子调控的Cre表达框和Neo基因表达框，同源右臂以及负筛选标记DTA依次连接，并构建到真核表达载体上得到。将该载体与含特异性靶向猪ROSA26基因第一内含子的CRISPR/Cas9打靶载体共转入猪胎儿成纤维细胞中，以阳性细胞为供体细胞，卵母细胞为受体细胞，通过体细胞核移植技术获得克隆胚胎；将克隆胚胎移入猪子宫内妊娠获得在ROSA26基因第一内含子定点整合有CD28基因且自动敲除标记基因的转基因猪。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201510557737.8

申请日期：2015-09-02

公开/公告号：CN105112449A

公开/公告日：2015-12-02

主分类号：C12N15/85(2006.01)I

申请/专利权人:中国农业大学

发明/设计人:索勋;李秋艳;黄广平;刘贤勇;李志远;李向清;付怡静;王一丁;田秀玲;索静霞;胡丹丹;徐邢宾;沈良才

主申请人地址:100193 北京市海淀区圆明园西路2号

专利代理机构:北京路浩知识产权代理有限公司 11002

代理人:王文君

国别省市代码:北京;11

权利要求：

CD28基因过表达载体，其特征在于，以目标生物基因组为模板，PCR扩增ROSA26基因第一内含子的左、右同源臂，CD28基因表达框，OCT4基因启动子，然后将同源左臂，CD28基因表达框，含LoxP位点的OCT4基因启动子调控的Cre表达框和Neo基因表达框，同源右臂以及负筛选标记DTA依次连接，并构建到真核表达载体上，即得CD28基因过表达载体。