DNA分子克隆方法
本发明涉及一种DNA分子克隆方法,其包括:获得含有ccdB基因的目标载体,所述ccdB基因两端带有SfiI酶切位点、第一接头序列及第二接头序列,所述接头序列为15-30bp,所述接头序列在SfiI酶切位点外围;获得目标基因,所述目标基因经PCR扩增使其两端同样带有接头序列,其序列与上述第一接头序列和第二接头序列分别一致;将所述含有ccdB基因的目标载体与所述目标基因,SfiI酶和Gibson克隆反应液混合反应,再经转化大肠杆菌获得重组克隆。通过本发明的方法可将DNA通过一步反应直接克隆到环状的目标载体,不受目标DNA序列限制,并且零背景。
发明专利
CN201510355929.0
2015-06-25
CN104911199A
2015-09-16
C12N15/66(2006.01)I
中国热带农业科学院热带生物技术研究所
言普;周鹏;沈文涛;黎小瑛
571101 海南省海口市龙华区学院路4号
广州三环专利代理有限公司 44202
郝传鑫
海南;66
一种DNA分子克隆方法,所述方法包括如下步骤:获得含有ccdB基因的目标载体,所述ccdB基因两端分别具有SfiI酶切位点和第一接头序列及第二接头序列,所述第一接头序列和第二接头序列为15‑30bp,所述第一接头序列和第二接头序列分别在SfiI酶切位点两侧;获得目标基因,所述目标基因两端分别带有第三接头序列及第四接头序列,其中所述第一接头序列与第三接头序列序列一样,所述第二接头序列和第四接头序列一样;第一接头序列为ACCTAGGTTCTGGGCCAGGA,第二接头序列为CCTGAGACCGAAGGCCCAGA。将所述含有ccdB基因的目标载体与所述目标基因,SfiI酶和Gibson克隆反应液混合反应。